染色 | 钙盐染色方法

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钙在人体内大量存在，存在形式分两种，一种离子钙，另一种结合钙，它们在正常的情况下渗透在所有组织和细胞中，构成骨骼作为支持人体的支架，在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等方面起着重要的作用。

许多染料可以与钙形成螯合物，包括茜素红S、红紫素、核固红等。钙盐染色常用的方法有两种，分别是：硝酸银法和茜素红S法。其中硝酸银法的原理是金属置换，硝酸银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时，钙被银所置换，银盐在光的作用下被还原为黑色金属银，适用于大量样本的钙盐组织染色；茜素红S属一种蒽醌类衍生物，是茜素磺酸钠盐，它能与碳酸钙或磷酸钙中的钙盐螯合形成橙红色复合物，染色液采用茜素红S和固绿，钙盐和固绿结合形成橙红色沉淀，适用于少量钙盐组织的染色。

一、硝酸银法

操作步骤：

1、切片脱蜡至水，蒸馏水洗；

2、浸入1%的硝酸银液中于强阳光下作用30-60min；

3、蒸馏水洗；

4、2%硫代硫酸钠水溶液处理2min；

5、水洗；

6、浅染胞核5min左右；

7、水洗，分化并蓝化；

8、伊红染2-3min；

9、常规处理，脱水透明，中性树胶封闭。

实验结果：钙盐呈黑色，胞核呈蓝色，其余为粉红色。

注意事项：

1、钙盐组织固定以中性福尔马林为佳。

2、作用时间取决于阳光照射时光的强度和时间。

二、茜素红S法

操作步骤：

1、组织固定于10%中性福尔马林或乙醇，常规脱水包埋；；

2、切片至95%乙醇；

3、载玻片竖立放置，彻底风干；

4、切片入含茜素红S染色液的玻片染缸，浸染1-5min；

5、蒸馏水快速冲洗；

6、入固绿染色液复染1min；

7、蒸馏水冲洗3次；

8、常规脱水透明，中性树胶封闭。

实验结果：钙沉积物呈橙红色，背景呈绿色。

注意事项：

1、茜素红S染色时间根据钙盐的含量来确定。可在显微镜下面观察，见钙盐成较深的橙红色即取出水洗，如染色液时间过长，就出现弥散现象，一般1-2min即可。

2、经过茜素红S染色液染色后，钙沉积物是双折射的。

上述染色方法可用于组织切片钙盐染色的同时，也可以用于细胞爬片的钙盐染色，

MDL近期用硝酸银法对诱导的大鼠成骨细胞进行钙盐染色，步骤及结果如下：

1、细胞爬片固定（4%多聚甲醛）；

2、浸入1%的硝酸银液中于强阳光下作用30-60min；

3、蒸馏水洗；

4、2%硫代硫酸钠水溶液处理2min；

5、蒸馏水洗；

6、浅染胞核5min左右；

7、蒸馏水洗，分化并蓝化；

8、伊红染2-3min；

9、常规处理，脱水透明，中性树胶封闭。