Western blot | 条带问题如何解决？

泡泡糖

[color=rgba(0, 0, 0, 0.85)]WB，蛋白质印迹(Western blotting)又称免疫印迹(immunoblotting)，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。

[color=rgba(0, 0, 0, 0.85)]蛋白实验虽然简单，但是条带容易出现的问题极多，下面来分享一下不同条带的原因和解决办法吧！

[color=rgba(0, 0, 0, 0.85)]条带弱、信号弱的原因？

• 抗体和抗原亲和力较低
• 一抗二抗稀释度过高
• 上样量、转膜不充足
• ECL曝光时间过短
• 封闭液选择不当
  

[color=rgba(0, 0, 0, 0.85)]解决办法

• 降低一抗、二抗稀释度；降低洗膜次数；
• 降低一抗、二抗稀释度，优化实验条件；
• 增加上样量；优化电转条件，使用丽春红或者考马斯亮蓝染胶检测转膜效果；
• 增加曝光时间；
• 降低脱脂奶粉浓度，或者更换封闭液。
  

[color=rgba(0, 0, 0, 0.85)]杂带较多的原因？

• 一抗或者二抗浓度偏高
• 细胞传代次数过多，蛋白表达不同
• 上样量过高
• 样本处理过程中目的蛋白发生降解加入蛋白，酶抑制剂
  

[color=rgba(0, 0, 0, 0.85)]解决办法：

[color=rgba(0, 0, 0, 0.85)]

• 使用经亲和纯化的一抗，尝试梯度稀释，优化实验条件，使用多肽封闭做对照；
• 使用原代细胞株，和现在的细胞株一起做参照；
• 太敏感适当减少上样量；
• 样本处理时在冰上操作。
  

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