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尽管早在 170 年前,人们就在细胞中观察到了自然发生的细胞死亡现象,然而长期以来它都被视为是一种细胞被动现象。随着科学探索的逐渐推进,人们逐渐认识到这一现象并非被动地发生,而是一种主动地细胞行为。
如今,细胞凋亡检测是目前非常热门的研究方向,它不仅可以用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究,还能应用于临床诊疗、新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及肿瘤的基因治疗等,对于相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价也具有举足轻重的地位。
细胞凋亡检测技术服务包括:Annexin V/PI双染检测细胞早期凋亡和TUNEL法检测细胞晚期凋亡。 可用于检测不同类型、不同处理方式、不同时期细胞凋亡状况及分析凋亡细胞比例。
首先,我们先来看一下细胞凋亡和细胞坏死的区别:
区别点 细胞凋亡 细胞坏死
起因 生理或病理性 病理性变化或剧烈损伤
范围 单个散在细胞 大片组织或成群细胞
细胞膜 保持完整,一直到形成凋亡小体 破损
染色质 凝聚在核膜下呈半月状 呈絮状
细胞器 无明显变化 肿胀、内质网崩解
细胞体积 固缩变小 肿胀变大
凋亡小体 有,被邻近细胞或巨噬细胞吞噬 无,细胞自溶,残余碎片被巨噬细胞吞噬
基因组 DNA 有控降解,电泳图谱呈梯状 随机降解,电泳图谱呈涂抹状
蛋白质合成 有 无
调节过程 受基因调控 被动进行
炎症反应 无,不释放细胞内容物 有,释放内容物。
凋亡和坏死-形态学区别:
细胞凋亡周期
在研究某个基因表达或者药物对细胞周期的影响,可以通过核酸染料PI标记DNA,以下和大家分享一下流式检测细胞周期原理和方法。
细胞周期(cell cycle):指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。
G0/G1期:有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上无法与G1期区分,细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。
S期:DNA开始合成,细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。
G2期和M期:当DNA复制成为4倍体时,细胞进入G2期。G2期细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期。从DNA含量我们同样无法区分G2期和M期。
Tunel 法应用
Tunel 是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。 |
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