定量PCR

基础科研

荧光定量PCR服务

概述:

荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

原理:

PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步

前景:

实时荧光定量PCR的出现,极大地简化了定量检测的过程,而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现,使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率,反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。随着生物芯片技术和荧光探针定量技术的结合,荧光定量PCR在医学检测及其他各个领域中的应用前景将更加广阔,令人欣喜。尽管如此我们也应清晰认识到,FQ-PCR技术在我国各个研究领域的应用并不多见,这就需要我国学者迎头赶上,使FQ-PCR技术更充分地推广,以推动研究工作的快速发展。
一般情况下,3周左右可完成实验!若遇特殊原因,比如实验材料降解,需要重新提供样品或者总RNA需要重新提取;基因表达量较低,需要构建标准品等情况,周期会有所延长。

MiRNA定量PCR

MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约20-24nt的非编码单链RNA,在细胞增殖、凋亡、器官发生、发育、造血以及肿瘤发生等若干途径中发挥重要作用。miRNA表达的定量分析是生物功能研究的基础,细胞、组织或血液中的miRNA的检测有助于发现新的早期诊断和预测疗效及患者预后的生物标志物。本公司提供优质的miRNA实时荧光定量PCR全套技术服务。

实验流程

1.miRNA提取。

2.利用加尾法将RNA逆转录成cDNA。

3.随机选择一个样品进行预实验,筛选引物,优化程序。

4.荧光定量PCR正式试验。

5.提交报告,原始Ct值。

服务内容

1.相对定量:以U6 或5S rRNA为内参,检测样本中相关miRNA的相对表达量。

2.绝对定量:以化学合成的miRNA成熟链为标准品,做5个或5个以上梯度点的稀释后制作标准曲线,通过标准曲线对样品进行相关miRNA绝对定量检测。

黄先生

提供免费试用：可冻干预混液、新型热启动Taq酶、MMLV逆转录酶、Tth酶、直扩试剂、恒温扩增、纯模板快速扩增试剂，磁珠法核酸提取试剂盒。小黄 13189351059