试剂: 供试品:重组Kex2蛋白酶(冻干粉),批号:Re170601 测活缓冲液:50mM Tris-HCl+2mM CaCl2,pH8.0 溶解缓冲液:20mM NaAc-HAc,2mM CaCl2,pH 5.2 仪器设备: TU-1901双光速紫外可见分光光度计 SW-CJ-1D型单人净化工作台 实验方法: 供试品的配制:取供试品适量,用20mM NaAc-HAc,2mM CaCl2,pH 5.2溶解至1mg/ml,取1mg/ml的供试品溶液用20mM NaAc-HAc,2mM CaCl2,pH 5.2稀释8X,稀释过程中动作轻柔,避免气泡的产生,所有操作均在超净台中进行。 活性测定:对蛋白进行反复冻融后测定活性,进行3次重复活性测定。 保存条件:-20℃以下。 实验步骤: 取光程为1cm的带盖石英比色杯,加入25℃预热过的3ml 底物溶液,按“紫外分光光度法操作规程”在405nm的波长处,调零。取供试品溶液10.0μl加入,立即计时并摇匀,在405nm的波长处测定吸光度值,每隔20s读取吸光度,共2min。 总结: Kex2反复冻融3次之后活性开始有所下降,下降到一定程度之后活性开始稳定。Kex2反复冻融5次之后活性基本稳定,比活符合标准。
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