最受欢迎的免疫磁珠试剂盒性能大比拼

千姿百态

细胞因子是机体免疫反应中不同细胞分泌的一类小蛋白质。例如，当白细胞介素4（IL-4）单独发挥作用时，它使得B细胞增殖，并生产出特定类型的抗体。但干扰素-γ（IFN-γ）同时存在时，会减少B细胞的数目并改变它们产生抗体的类型。麦吉尔大学蒙特利尔神经学研究所的实验治疗计划主任Amit Bar-Or指出，这表明免疫反应并不是单一的细胞因子指导的。

在过去的10年中，许多大的生物公司生产出来各种用于同时检测几十种细胞因子的试剂盒。许多试剂盒利用一对抗体进行检测，其中一个用来捕获细胞因子，另一个用来检测所捕获的细胞因子。一些试剂盒将捕获的抗体附加到一个平坦的表面，例如传统的酶联免疫吸附。但现在比较流行的试剂盒的做法是，研究人员将他们的样品添加到包含不同类型的混合免疫磁珠的培养板中。每一种类型的磁珠表面都包被着所测量细胞因子对应的抗体类型，并且与不同的荧光染料相结合，以便在混合物中区分不同的磁珠。样品加入后，成功捕获抗体的磁珠的荧光分子标记能够将它们与空磁珠区分开来。基于磁珠的检测方法一般使用由Luminex公司开发的Luminex免疫磁珠，这种微珠需要特殊的仪器进行检测；或者使用与微珠兼容的传统流式细胞仪检测。Luminex的相应仪器设备可以区分100到500种不同比率荧光染料的免疫磁珠，磁珠一般含有两种或三种染料，因而不同的染料比率能够形成多达100到500种荧光而被识别，而传统流式细胞仪只能测量30种染料组合。

研究人员往往会基于特定的细胞因子选择多路复用试剂盒，尽管许多公司出售的试剂盒提供的面板很大。有些公司可以提供小面板试剂盒的定制工作，帮助研究人员缩小他们想了解的免疫反应、疾病或治疗相关的细胞因子范围。无论广告上介绍得有多好，验证试剂盒功效的最好方式就是逐个使用不同的试剂盒来检测同一个样品。Bar-Or建议在实验前可以与试剂公司沟通获得试用折扣。

接下来就介绍市面上最受欢迎的几种基于Luminex免疫磁珠检测的流式细胞仪检测系统。

BIO-RAD

Bio-Plex Pro系统

根据2012年对北美和欧洲学术界研究人员和生物技术/制药公司的调查，Bio-Rad公司是目前北美市场最大的抗体检测试剂盒卖家，他们生产的试剂盒采用Luminex公司的免疫磁珠。Life Technologies公司和EMD Millipore公司分别位居第二和第三。

研究人员可以利用Bio-Rad公司的系统来测量64种不同的人类细胞因子，同时公司也提供可以一次性捕捉21到27种细胞因子的试剂盒。使用该公司的在线工具，研究人员还可以设计细胞因子检测磁珠、定制一个较小的磁珠子集或购买特定类型的磁珠。Bio-Rad公司检测也适用于检测小鼠和大鼠的细胞因子，也可用于为犬和灵长类动物做特定的疾病检测。

优势：该公司提供不包含重复探针的21- and 27-plex试剂盒，因此研究人员可以通过两组平行试验捕捉到48种细胞因子，从而扩大探索免疫反应的范围。

挑战：与大多数多路复用分析一样，Bio-Plex系统检测细胞因子的能力取决于研究人员所用的样本类型。Bio-Rad的17-plex试剂盒擅长探测样本中的IFN-γ，而在Bar-Or的一个研究中，他们发现Bio-Rad的10-plex试剂盒对于低浓度血清样品中的IFN-γ敏感度很差。

价格：试剂盒价格从850美元（3-plex）到的3500美元（27-plex）不等。Single-plex子集每个售价200美元。

EMD MILLIPORE

Milliplex

Millipore的系统能捕获最广泛的细胞因子：108种人类细胞因子以及小鼠、大鼠、猴、狗、猪的细胞因子。Millipore公司最大的试剂盒可以同时检测41种人体细胞因子，其中大部分与Bio-Rad公司的48种重叠。41个细胞因子通常可以在同一样品中被检测到，虽然一些细胞因子在血清和血浆中浓度很高，需要稀释和独立的测量。

优势：除了广泛的细胞因子检测能力，Millipore试剂盒只需要25微升样品量，这是其它试剂盒所需样品的一半。对于西雅图华盛顿大学医学副教授Stephen De Rosa来说，Milliplex比Bio-Rad、 Life Technologies和 BD Biosciences生产的试剂盒的样本重复测量的一致性更高。尽管如此，研究人员还是应该找到针对自己样品最合适的试剂盒。

挑战：公司在试剂盒中应当使用标准细胞因子蛋白制剂，如若不然，不同批次的试剂盒得到的结果很难进行比较。公司正在试图解决这一问题，例如每一批次的试剂盒都提供相应的标准对照。

成本：试剂盒价格范围从500美元（single-plex）到1100美元（5-plex）不等，41-plex试剂盒售价在5300美元。

LIFE TECHNOLOGIES

Novex Multiplex Assays

Life Technologies生产的测定人类细胞因子最大的试剂盒型号是30-plex和25-plex。几乎所测定的所有细胞因子都与Bio-Rad和Millipore试剂盒重叠。试剂盒可用于小鼠、大鼠、猪、猴的细胞因子。

Bio-Rad公司和Millipore公司已逐渐转向使用2007年首次推出的Luminex磁珠，Life Technologies除了磁珠试剂盒外，仍然继续为喜欢他们和有需要的研究人员提供非磁珠试剂盒。使用磁珠检测，可以使抗体与结合因子之间的洗涤更加简单，因为磁珠可被磁铁吸引，研究人员可以简单地反转亲和板倾倒液体。而非磁性珠，研究人员必须使用特殊的方法进行分离，非常复杂。

优势：兹堡大学的癌症研究所免疫学监测和细胞产物实验室的Lisa Butterfield说她选择Life Technologies试剂盒的原因是这家公司是唯一会向她提供定制面板的微珠有轻微的交叉反应说明的Luminex磁珠供应商，这对她的研究非常重要。

挑战：一些研究人员可能回避使用Novex试剂盒，因为细胞因子的面板相对较小。

价格：无论磁珠还是非磁珠，试剂盒价格范围从585美元（2-plex）到3,400美元（30-plex）不等。

BD BIOSCIENCES

Cytometric Bead Array (CBA)

虽然生产的试剂盒没有Luminex公司那么受欢迎，BD Biosciences公司仍然占有最大的市场份额。

目前BD销售6种试剂盒，可以检测7种人类细胞因子，同时他们也提供小鼠和灵长类动物细胞因子的试剂盒。虽然提供的操作板小于Luminex公司，但他们的这种设计的目的是研究特定的生物过程，如过敏性反应或感染的炎症反应。除此之外，如果客户购买了测量单一细胞因子种类的免疫微珠子集，也可以将它们通过不同的组合混合在一起，同时检测多达30种细胞因子。

优势：伊坎医学院儿科助理教授 Madhan Masilamani选择了BD的CBA试剂盒，因为他的实验室里已经有流式细胞仪，使用别的产品必须花时间到别的地方使用仪器。

挑战： BD正在销售下一代流式细胞仪Accuri C6，能够简化使用流程。CBA试剂盒使用非磁珠，即使CBA减少了洗涤和加入试剂的步骤，但是检测步骤依然比较繁琐。

价格：根据操作面板的不同，试剂盒售价在1200美元到1500美元不等。Individual Flex Sets售价为250美元，购买相应的缓冲液需要附加225美元。CBA数据分析的流式细胞仪软件售价为1500美元左右。

enzyme

普瑞迈格生物技术也做磁珠，性价比高。