鲁米诺吖啶酯等化学发光试剂的发展应用趋势

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化学发光原料主要有三种：鲁米诺类，吖啶酯类，电化学发光。　　在我们国内免疫学的发展主要经过了三个阶段：　　放射免疫法（RIA）已经处于衰退期，仍普遍用于县级以上医院，试剂系列化；　　酶联免疫发（ELISA）普遍用于临床机构，产品成熟，试剂尚未系列化（运用色原ADPS，TOOS，MAOS等同过氧化氢偶联的方法就是属于此类）；　　化学发光免疫法（CLIA）这个是比较先进的方法，个别较大医院应用，在国外已经比较成熟，但国内尚属于导入期或成长期，主要依赖进口。鲁米诺、异鲁米诺、碱性磷酸酶AMPPD的化学发光检测需要酶参与属于酶促化学发光吖啶酯系列如吖啶盐、吖啶磺酰胺、吖啶酰肼等发光反应不需要酶参与，属于直接化学发光，灵敏度更高三联吡啶钌 属于电化学发光，这个对检测机构要求高设备昂贵，国内能用的较少。1#吖啶酯DMAE-NHS

　【英文名】6'-Dimethyl-4'-（N-succinimidyloxycarbonyl）phenyl-10-methyl-acridinium-9-carboxylate methosulfate

　　【中文名】吖啶酯DMAE-NHS          9-[[4-[[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基）氧基羰基]-2,6-二甲基苯氧基羰基]-10-甲基-吖啶硫酸甲酯盐

　　【CAS#】115853-74-2

　　【分子量】594.589

　　【外观】黄色固体/粉末

【分子式】C29H26N2O10S

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　　【外观】黄色固体或粉末

　　【存储条件】室温，避光防潮

　　【用途】化学发光及免疫分析、受体分析、核酸及多肽检测等研究。作为直接化学发光免疫分析的化学发光剂，用于抗原、抗体、蛋白质等的检测分析。检测分析过程中无需附加催化剂，DMAE-NHS在碱性介质中被H2O2氧化时，经过一个二氧化酮的中间体，产生电激发的N-甲基吖啶酮，其返回基态时，在430nm处释放光子。

　　【产品优势】纯度≥98%水溶性好，工艺稳定，可保证产品外观为纯白色晶体粉末。

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鲁米诺发光试剂

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　　【英文名】3-Aminophthalhydrazide

　　【中文名】鲁米诺/3-氨基苯二甲酰肼/发光氨

　　【CAS#】521-31-3

　　【分子量】177.16

　　【分子式】C8H7N3O2

　　【存储条件】室温，避光防潮

　　【化学性质】易溶于碱液，能溶于稀酸，几乎不溶于水，难溶于醇。中性或淡酸性溶液暴露在紫外光中时显强烈的亮蓝色荧光。

　　【用途】化学发光试剂，常用于化学发光免疫分析，如金属阳离子和血液检测。

　　【发光率检测】最适荧光波长为425nm（在60mMK2S2O8,100mK2CO3,PH11.5溶液中检测化学发光率）。

　　鲁米诺/发光氨/Luminol因其结构简单、易合成、水溶性好，以及发光量子效率高等特点，鲁米诺是最常用的液相化学发光试剂之一。自从1928年Albrecht首次报道了鲁米诺与氧化剂在碱性溶液中的化学发光反应以来，人们对该化学发光体系的研究就一直十分活跃，使得该化学发光体系被应用于许多领域之中。

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异鲁米诺化学发光试剂
　【英文名】4-Aminophthalhydrazide
　　【中文名】4-氨基邻苯二甲酰肼/6-氨基-2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮
　　【CAS#】3682-14-2
　　【分子量】177.16
　　【分子式】C8H7N3O2
　　【存储条件】室温，避光防潮
　　【外观】类白色粉末
　　【用途】化学发光试剂，常用于化学发光免疫分析，如金属阳离子和血液检测。
　　【产品优势】纯度：≥98%（HPLC），水溶性好，工艺稳定，批间差异小。

鲁米诺和异鲁米诺都是化学发光剂，在过氧化物酶或血红蛋白、铁等的催化下，同过氧化氢反应，发出蓝色荧光。
异鲁米诺虽然使用并没有鲁米诺那么广泛，但是在血液检测上有着不可替代的作用。环状酰肼结构是鲁米诺与异鲁米诺化合物发生化学发光的主要结构，对其进行相关修饰会导至化学发光特性几乎完全丧失；对鲁米诺和异鲁米诺化合物氨基进行修饰，会导至鲁米诺的发光效率明显降低，而异鲁米诺的发光效率却明显著提高。

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吖啶酯Me-DMAE-NHS
　　【英文名】2',6'-Dimethylcarbonylphenyl 10-Methyl-9-acridinecarboxylate 4'-NHS Ester Triflate
　　【中文名】吖啶酯（Me-DMAE-NHS）
　　【分子量】632.56
　　【分子式】C29H23F3N2O9S

　　【外观】黄色固体或粉末
　　【存储条件】室温，避光防潮
　　【用途】可用于蛋白、抗原、抗体、核酸（DNA、RNA）等的标记。
　　【产品优势】纯度：≥98%（HPLC），水溶性好，工艺稳定，批间差异小。

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3#吖啶酯NSP-DMAE-NHS
9-[[4-[[(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)氧基]羰基]-2,6-二甲基苯氧基]羰基]-10-(3-磺基丙基)-吖啶内盐
　　【CAS#】194357-64-7
　　【分子量】590.60
　　【外观】黄色固体/粉末
【分子式】C30H26N2O9S

　　【存储条件】室温，避光防潮
　　【用途】化学发光及免疫分析、受体分析、核酸及多肽检测等研究。
　　【产品优势】纯度：≥98%（HPLC），水溶性好，工艺稳定，批间差异小。
【性质】吖啶酯是一类可用作化学发光标记物的化学物质，在碱性H2O2溶液中，吖啶酯的分子受到过氧化氢离子进攻时，吖啶环上的取代基能与吖啶环上的C-9和H2O2（过氧化氢）形成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2和电子激发态的N-甲基吖啶酮。

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5#吖啶盐NSP-SA
　　【英文名】（tosyl）carbamoyl）acridinium-10-yl）propane-1-sulfonate （NSP-SA）
　　【中文名】吖啶酸丙磺酸盐（NSP-SA）
　　【CAS#】211106-69-3
　　【分子量】584.66
　　【分子式】C28H28N2O8S2

　　【外观】黄色固体或粉末
　　【存储条件】室温，避光防潮
　　【用途】可用于蛋白、抗原、抗体、核酸（DNA、RNA）等的标记。吖啶及其盐的稀溶液呈紫色或绿色荧光，盐类的稀溶液具有绿色荧光，再稀释，由于盐水解，变为游离的吖啶，呈紫色荧光。 吖啶盐用途广泛，可用于做光催化剂，染料的制备等。
　　【产品优势】纯度：≥98%（HPLC），水溶性好，工艺稳定，批间差异小。

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6#吖啶酯NSP-SA-ADH 化学发光试剂
 
　　【英文名】NSP-SA-ADH
　　【中文名】吖啶酰肼（NSP-SA-ADH）
　　【分子量】740.85
　　【分子式】C34H40N6O9S2
　　【外观】黄色固体或粉末
　　【存储条件】室温，避光防潮
　　【用途】可用于蛋白、抗原、抗体、核酸（DNA、RNA）等的标记。吖啶酰肼末端适用与含有醛基的多糖，核酸或者蛋白质等反应，对其进行吖啶标记。
　　【产品优势】纯度：≥98%（HPLC），水溶性好，工艺稳定，批间差异小。

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吖啶盐NSP-SA这种吖啶酯为吖啶羧酸，不能直接标记蛋白抗体，需要加入缩合剂 EDCI 等，才能与含胺基的蛋白发生偶联反应。

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化学发光检测在临床应用越来越广泛，比如以下相关检测：
甲状腺激素检测、生殖激素检测、肾上腺/垂体激素检测；
贫血因子、肿瘤标记物、感染性疾病；
糖尿病、心血管系统、病毒标记物；
骨代谢、过敏性疾病、治疗药物监测等
有关化学发光平台的项目都可以上德晟科技官网咨询客服selenite6

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在蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot中，使用的ECL发光液就是由鲁米诺制作而成的。一般是Western Blot的最后一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆盖pvdf膜，可以显色来观察实验结果。一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢。

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鲁米诺和异鲁米诺两个都是化学发光剂，在过氧化物酶或血红蛋白、铁等的催化下，同过氧化氢反应，发出蓝色荧光。
因此可以用鲁米诺来检测微量血迹，以及细胞中的铜、铁及氰化物等。

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鲁米诺在水中的溶解度很低，一般溶在碱性溶液里，例如Luminol储备液0.01mol/L :1.772g鲁米诺用0.1mol/L,的氢氧化钠溶液溶解，定容至1L

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色原底物如TOOS、MAOS，荧光底物，化学发光底物如鲁米诺、吖啶酯，这些都是非常重要的底物。
除了吖啶酯不需要酶的催化之外，其它的都是作为辣根过氧化物酶HRP的底物，在HRP的催化下才能与过氧化氢反应。
其中色原底物用于生化试剂盒如检测肝肾功能血糖血脂等，鲁米诺吖啶酯用于免疫试剂盒，如肿瘤标志物、心肌损伤标志物，肝肾炎，性病等。

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吖啶酯化学发光标记常用的几种缓冲液有Tri-HCl、PBS/BSA、MES等缓冲液，具体的可以根据标记的对象蛋白/抗体、核酸，适应的pH调整，以选用最合适的浓度及合适的缓冲剂

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新型的吖啶酯与传统吖啶酯相比有很多优越的性能，更能满足实验检测的需求，在合成上需要更多的步骤来作官能团的修饰，吖啶环上无取代和有取代的吖啶酯的合成路线区别也是很大的

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在检测时，Trinder‘s显色试剂TOOS、MAOS等与4-AA偶联显色反应，在本质上与化学发光法类似，都是作为过氧化物酶的指示底物，只不过一个是作为色原底物，一个是作为发光底物。

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吖啶酯DMAE-NHS 和吖啶酯Me-DMAE-NHS非常相似

差别是吖啶的N原子上连的一个是硫酸甲酯基，一个是三氟甲基磺酸基。都比传统吖啶酯AE-NHS位阻大，抗水解能力强。"

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吖啶酯化学发光的关键在于吖啶酯在碱性条件下与过氧化氢相互作用形成过氧化合物的活泼中间体，然后再在电激发的条件下转化为稳定的终产物：吖啶酮，同时能量以光的形式释放出来。吖啶酯化学发光反应机理的特点反应光淬灭的效应较小，而且反应过程中的发光基团的解离、发光效率等都不会受到连接臂长短的影响。

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鲁米诺/发光氨通常用于酶促化学发光实验以及刑侦上的微量血迹检测。由于其结构简单、易合成、发光量子效率高的特点，现也被用于蛋白质印迹试验western blot中。

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