超敏C反应蛋白检测方法和临床应用进展

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作为炎症的指标．C一反应蛋白fC—reactivepro．tein．CRP)早在20世纪40～60年代已经开始应用于临床。CRP是一种非特异性的急性时相蛋白，属分泌型蛋白质：因其能和肺炎链球菌的细胞壁的C多糖起沉淀反应而得名。．当有急性炎症、创伤和心血管疾病时CRP升高。近10年文献统计显示[1]，CRP是目前国内外研究的重点．尤其集中在hs—CRP研究领域。hs—CRP是超敏C反应蛋白fhighsensitivityC—reactiveprotein，也称为高敏C反应蛋白)的简称。其检测的对象与常规C反应蛋白检测一致．是同一物质在不同层次上的两个指标。健康人的血清CRP含量极微，在人体内长时期保持恒定．不受季节及昼夜节律的影响因此，微量的CRP变化就可以提示人体生理状态的改变。
目前．hs—CRP越来越多地应用于预测动脉粥样硬化及心血管相关疾病、代谢综合症等方面。本文就hs—CRP的检测要求、实验室测定方法和临床应用作初步探讨。
1 超敏C反应蛋白的一般性能要求一 般认为．我国健康人群hs—CRP水平的中位数范围为O．581．13mg／L。多数研究认为hs—CRP在3mg／L以下．冠状动脉事件发生危险较低。hs—CRP一般可检测到．20mg／L的水平．以便于区分低水平的炎症状态．这对于确定冠心病的危险性很重要。通常．基于临床用途的hs—CRP测定方法的不精密度在0．20mg／L浓度时应小于10％圆而常规CRP则在由于正常值较大．对于最低检测限没有太严格要求。在溯源性方面，对于常规CRP的检测，美国FDA只要求有溯源性即可：但对于hs—CRP．不仅要有可溯源性。而且必须要求溯源至IFCC、BCR或CAPCRM470131。
2 超敏C反应蛋白的测定方法临床上最早测定CRP的方法是凝集法：因其精确度和准确度都较差，现在基本上很少使用。常用的免疫比浊法f包括散射和透射法1也较难达到超敏的要求。最近出现的胶乳增强免疫透射比浊法，大大提高了分析的灵敏度f检测低限为0．005～0．10rag／L不等1．在低浓度CRP(~10．15～lOmg／L)~Ij定范围内有很高的准确度。胡敏等人采用该方法在全自动生化仪测定hs—CRP研究显示，该技术测定hs—CRP检测范围为0．125～12．5mg／L．最低检测限0．115mg／L，批内、批间CV分别为0．89％、O．90％。一种可检测常规CRP和hs—CRP的全程CRP．采用胶乳免疫比浊法．可以同时进行常规CRP和hs—CRP的检测．无需更换试剂。其线性范围0．080～355．950mg／L．最低检测限为0．057mg／LIs。袁宝军等人[61用免疫透射比浊法(ITD)和胶乳增强免疫透射比浊法(L—EITD)检测C一反应蛋白含量并进行对比实验。结果表明两者的检测结果有较好的相关性．但L—EITD抗干扰的能力更强。因hs—CRP未实现标准化．不同方法的检测结果之间是不一致的：但有研究表明乳胶凝集比浊法与速率散射比浊法检测结果阳性率无显著差异，敏感性一致。
3超敏C反应蛋白的临床应用3．1 超敏C反应蛋白与心血管类疾病美国心脏病协会和美国疾病控制和预防中心定义了hs—CRP三级分类来预测远期心血管危险事件[81。具体分类为：低危组：／L；中危组：1～3mg，L；高危组：3～lOmg／L。hs—CRP>IOmg／L时为因素不确定的升高，可能与感染、炎症等因素有关，不能作为评价心血管危险事件的危险因素流行性病学研究表明[91．血清hs—CRP水平增高是远期心血管事件(包括心肌梗死、缺血性脑卒中、周围血管疾病、心脏性猝死等1的一个强有力的独立预测因子。研究发觋【枷，虽然血脂与冠心病存在着密切的关系．但5O％的心肌梗死患者无明显的高脂血症．约有20％的冠状动脉事件发生在没有任何经典危险因素(高血脂、糖尿病、吸烟、冠心病家族史、高血压)的个体。
甘润韬等人【l1]研究发现．血清hs—CRP水平与冠状动脉事件之间存在着明显的联系．高血清hs—CRP的ACS患者比血清hs—CRP正常者冠状动脉事件发生率增高达1．9倍进一步发现TC／HDL—C、hs—CRP均异常组冠状动脉事件的再发率显著增高达36．7％．为正常组3．43倍．为单纯血脂异常或hs—CRP异常的患者冠状动脉事件再发率1．84及1．65倍牛华等人ll2l研究表明．急性冠脉综合征患者血清hs—CRP水平明显升高。作为其独立危险因素．hs—CRP水平浓度测定可作为判断急性冠脉综合征发生、预后的监测指标。
Rifai等在冠心病一级预防研究中发现．TC／HDL—C、hs—CRP同时异常可以显著预测冠状动脉事件的再发。因此。hs—CRP或f和1血脂水平的联合检测可以有效的提高对ACS患者6个月内冠状动脉事件发生异常的识别。也有研究表明。ApoE基因型与Hs—CRP和TC／HDL—C三者同时研究．更能前瞻性地评估心血管疾病的发病风险。金志文等人【15】研究表明，血清尿酸、hs—CRP、颈动脉斑块指数均与冠状动脉病变相关，血清尿酸、hs—CRP和斑块指数异常同时存在对预示和诊断ACS更具有临床意义这一结果为临床上进行冠心病有效的诊治提供更积极的指导意义。
总之．hs—CRP的重要意义在于指示进行中的炎症与远期心血管危险事件关系：而与血脂等关联指标联合检测．可能对临床疾病有更好的诊断作用。
3．2 超敏C反应蛋白与代谢综合症
代谢综合征fMS)包括有中心性肥胖、高血糖、高血压、血脂异常、内皮功能异常、炎症、氧化应激、促凝、低纤溶等危险状态。这些因素每一项均可促进动脉粥样硬化的发生和发展：其中在动脉粥样硬化中，炎症因子可能起重要作用大量流行病学调查和实验研究表明．肥胖和炎症反应是MS重要组成部分。
研究表日月【．代谢综合征合并冠心病的hs—CRP水平明显高于无冠心病的代谢综合征者fP．05)，随着代谢异常数量的增加．hs—CRP水平也逐步增高．冠心病hs—CRP显著高于非冠心病患者(P．05)。在调整空腹血糖、TC、TG、LDL—C、HDL—C等因素的影响后．协方差结果显示hs—CRP在MS中合并冠心病组仍高于冠心病组(P<0．051，提示hs—CRP可能就是MS和冠心病的危险因子．炎症可能参与并促发MS和动脉粥样硬化的过程。
Esposito等进一步证实．肥胖妇女血清IL一10、IL一6、CRP水平均显著高于非肥胖妇女。一年生活习惯的调整之后．肥胖人群的体质量下降(10．9±1．7)kg，且与其明显降低的IL一1O、IL一6、CRP相关。研究发现【．MS组中．hs—CRP与BMI之间存在正相关=0．372，P=-O．002)；BMI可能为hs—CRP的影响因素。
因此．代谢综合症可认为炎症性疾患，干预炎症过程可能同时减轻动脉粥样硬化的发生．hs—CRP可以起到良好的预测作用。
3．3超敏C反应蛋白与糖尿病hs—CRP作为一种炎性标志物已被确认是糖尿病心血管事件的独立预测因子．其升高与糖尿病心血管事件密切相关hs—CRP比常规CRP对糖尿病及其心血管并发症的危险性分析更为敏感．可使低级别炎症或称为亚临床炎症状态的分析成为可能。
血浆hs—CRP水平升高的人群易患糖尿病．而糖尿病病人血浆hs—CRP水平普遍升高。Thorand等人【删研究了2052名年龄范围在45～74岁的男性受试者．发现血浆hs—CRP>2．91mg／L受试者后期发展成为糖尿病的概率是血浆hs—CRP<0．67mg／L受试者的三倍。“等人[2lJ的断面研究数据显示，健康人群血浆平均ClIP水平为1．62mg／L。空腹血糖受损人群血浆平均hs—CRP水平为2．63mg／L，而新诊断为糖尿病的人群血浆平均hs—CRP水平为3．09mg／L。
有研究表明．论血清中的hs—CRP及IL一6水平与2型糖尿病合并冠心病密切相关，hs—CRP、IL一6在2型糖尿病的发病中可能为始动因素之一。联合检测hs—CRP、IL一6水平对早期发现2型糖尿病合并冠心病有一定意义。D一二聚体和hs—CRP的定期监测对指导临床有效防治和控制糖尿病并发血管疾病具有一定的应用价值。
3．4超敏C反应蛋白妊娠高血压妊娠期高血压fhypertensivedisordercomplicat．ingpregnancy,HDCP)是严重威胁母婴安全与健康的妊娠特异性并发症．是导至孕产妇及围产儿死亡的主要原因之一．其发病原因尚不清楚。早在2001年．血清CRP是高血压的独立危险因子就已经被明确提出。研究发现．HDCP组hs—CRP水平显著高于正常对照组。并随着病情的发展。血清hs—CRP水平逐渐升高．提示HDCP患者的动脉壁存在有炎症反应。HDCP患者hs—CRP浓度升高的机制可能与血管内皮损伤有关：hs—CRP水平可作为判断HDCP严重程度的依据。
4 展 望目前，超敏C反应蛋白在临床上得到越来越广泛的应用。及时准确的检测CRP对相关疾病的早期诊断和治疗有重要的意义但从测定hs—CRP的结果来看，不同检测方法之间．不同自动化测定仪之间存在着差异，这不利于临床对该指标的有效应用。另外，不同的检测体系中参考范围不一致．这也会给临床诊断造成一定的困难。因此。CRP_l贝0定方法标准化问题有待于进一步的研究和探讨各医学实验室也应根据不同实际情况及不同I临床需求加以选择运用。
hs—CRP检测的一个发展方向是与多种临床指标联合应用。hs—CRP的应用已从最初的感染性疾病诊断拓展到了心血管疾病的预测和监测等多方面；结合血脂、D一二聚体等指标联合检测．对于心血管疾病发生的预测是一个非常有前途的研究方向而在实际临床中．也需要全程检测hs-CRP的变化来指导临床的治疗和用药。随着hs-CRP检验技术的发展，CRP（www.okaybio.com/crp/c-reactive-protein/）的临床应用前景将更加广阔。