[转载]冰冻混合人血清酶校准品的赋值

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酶学标准化可 以定义为不依赖于分析原理、分 析方法和分析系统而获得可比结果 的性能 lJ。实 现标准化需要有原级参考物质或公认的参考方法 ；常规测量程序需与参考测量程序有相 同的分析特异 性 ；常 规 校 准 品应 具 有溯 源 性 与 互 通性 。。 自 2002年，国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)相 继颁布了 7种酶 37的参考测量程序，这些定义了特定酶活性测定条件的参考测量程序构成了计量学 溯源链的顶端。目前关键问题是获得具有溯源性与 互通性的酶校准品。采用经参考测量程序赋值的人 血清作 为酶校 准品是 建立溯 源性 的可选 方法 J。 北京市临床检验 中心(BCCL)组织 了酶学参考实验 室 网络为冰冻混合人血清酶校准品赋值 。本文拟介绍酶校准品的赋值过程，并就其应用问题进行探讨。

1 材 料 与方 法

1．1 主要仪器及试剂 日立 7600全 自动生化分析 仪 ；校准 品(批号 155211-03，德 国 Roche公 司)；聚丙稀无菌锥形 离心管 (美 国康宁公司 )；量简 、烧杯 等符合 国家 A级标准的玻璃器皿 。

1．2 血清的收集 、制备与保存 收集无乳糜 、溶血 的患者血清 。分别收集丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、 天冬 氨 酸 氨 基 转移 酶 (AST)、^y一谷 氨 酰 转 移 酶 (GGT)3项 中至少一项大于 300U／L的血清 ；收集 肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶 (LDH)2项 中至少一项 大于 500U／L的血清 ；于 一80保存 。由北京航天总医院参考实验室按照酶学标准物质制备程序制备 所需浓度水平 的混合人血清酶校准 品，浓度控制在 参考 区间上 限的2～5倍 ，分装 于 1mL冻存 管 中。 BCCL1号 校准 品 (BCal一1)包 括 ALT、AST、GGT3 项；BCCL2号校准品 (BCal-2)包括 CK、LDH2项 。 样品经均匀性检验符合要求。于 一80cIC保存。

1．3 酶学参考实验室 网络 酶学参考实验室 网络 由具备 以下资 质 的实验 室组 成 ：(1)建 立并 运行 IFCC推荐的ALT、AST、GGT、CK、LDH5项酶 的参考 测量程序 ；(2)分析国际有证标准物质 以验证测量 的准确性；(3)参加IFCC组织 的国际参考 实验室室 间质评计划 (RELA)或 国内候选参考实验室室间 比 对计划。共筛选国内6家符合上述条件的实验室组 成酶学参考实验室网络，分别 为首都医科 大学附属 北京朝阳医院、北京航天总医院、首都医科大学附属北京世纪坛医院、中国医学科学院北京协和医院、北 京利 德曼 公 司 、四川迈 克公 司 。

1．4 冰冻混合人血清酶校准品赋值 统一用 IFCC 颁布的血清酶参 考测量程序 驯进行 测量 ，待赋值 血清在复融后4h内完成测量。赋值实验室在正式 赋值前 7d内测量 国际酶学有证参考物质 (ERM)， 以“各次测量结果均在 ERM 的靶值±扩展不确定 度范围内”来确认其测量能力 。

在对冰冻混合人血清酶校准品赋值过程 中进行 质控 ，统一用罗 氏校准品作为质控品 ，以 2日内 10 次测量结果 的均值 ( )作 为质控 图中心线 ，以 ± 3％元作为失控限，每批测量前、后均进行质控 ，并确 保质控在控。记录质控结果。

对冰冻混合人血清酶校准 品进行赋值时 ，每种 酶进行 4个批次的测量 ，每个批次测量 3次 ，共计测 量 12次。每 日进行 2个批次测量 ，上、下午各进行 1次 ，共计测量 2d；每批次 3次测量使用同一支样 品，不同批次测量更换另一支样品 ，记录测 量结果。BCCL收集汇总各实验室测量结果并进行统计。以 各实验室 l2次测量结果 的均值作为该室的血清定 值，再以 6家实验室血清定值 的均值(剔 除 ± 3．5％元以外数据 )作为最终 的冰冻混合人血清酶校 准品的赋值 。

2 结果

6家实验室 分别 以字母 A、B、C、D、E、F代表 (与上文实验室排序无对应关系)。5项酶室 内质控 数据统计结果见表1。冰冻混合人血清酶校准品 5 种酶检测的统计结果见表 2。BCCL冰冻混合人血 清酶校准品赋值结果室间变异与 RELA室问变异 的比较结果见表 3。6家实验室冰冻混合人血清酶校 准品 AIJT、AST、GGT、CK、LDH5项酶的赋值结果分 另0为(112．16±1．94)、(101．37±0．37)、(175．74±1．82)、(370．92±4．48)、(309．69±1．78)U／L。室 内质控 的变异系数 (CV)分别为 0．33％～1．40％、 0．50％ ～ 1．24％ 、0．37％ ～ 1．49％ 、0．50％ ～ 1．30％ 、0．61％～1．11％。冰冻混合人血清酶校准 品赋值 的室间变异分别为 1．73％ 、0．36％ 、1．04％ 、 1．21％、0．58％。BCCL冰冻混合 人血清 酶校准 品 赋值结果的室间变异与赋值 同期 2011年 RELA剔除等效限外测量结果的室间变异相近或 比其略小。

3 讨 论

获得具有溯源性与互通性的酶校准品是实现酶 标准化的关键。用经参考测量程序赋值 的具有互通性的酶校准品可使不同测量程序酶学测定结果趋于 一 致 ，并使结果溯源至参考测量程序 “J。 目前 国 内基本不生产酶校准品 ，而 国外酶校准品溯源性不 一 、互通性不明且价格 昂贵，给临床实验室的溯源校 准及应用带来困难。用经参考测量程序赋值 的人血 清作为二级参考 物质是一种可能 的解决方法。由 此 ，BCCL采用 IFCC参考测量程序赋值 的冰冻混合 人血清作为校准品，其互通性已有文献证实¨ 。

血清样品的合理赋值是获得酶校准品的关键步 骤之一 。就酶校准品的赋值 ，ISO18153(2003)明确 规定酶学参考物质应通过正式的实验室间合作研究 定值¨ 。关于定值的确定 ，RELA 拟采用统计值 ， 但要求实验室数大于 5。BCCL采用 6家实验室 的 统计均值作为定值。鉴于我国临床酶学参考测量室 内变异在 1％左右 ，兼顾 同期中国实验 室参加 国际 RELA的测量结果和国内参考方法实验室 比对计划的测量结果的偏离情况 ，BCCL将 ±3．5％面作为等 效限。赋值结果显示，6家实验室 ALT、AST、GGT、CK、LDH5项酶的室问 CV为 0．36％ ～1．73％，接近 或略小于同期 RELA的室间 CV。

酶校准品是酶催化活性正确量值 的载体 ，通过 校准可将该量值 的溯源性传递到患者样品的结果 ，其应用前提是参考测量程序与相应的常规测量程序 具有相同的分析特异性 。据我国室间质评资料统计数据显示，目前我国绝大多数临床实验室用不加 5． 磷酸吡 哆醛 (PIJP)的氨基转 移 酶的常规 方法 ，使 IFCC参考测量程序赋值的酶校准品 的应用受到 了 限制。ISO18153(2003)指 出临床酶学参考 方法需由有关国际组织约定 ，不应建立和应用 国家或地区 酶学参考方法。我 国原卫生部已等同采用 IFCC的 参考测量程序，并已将其转化为我国卫生行业标准。 因此 ，应推荐与提倡使用与参考钡0量程序具有相同 的分析特异性 的常规测量程序，这样才能实现溯源， IFCC参考测量程序赋值的酶校准品亦得以应用 。