分析灵敏度（检测限）

萝卜涨价了

近年来，在来稿和文献中就分析灵敏度性能的 含义众说不一，如不深入讨论，真正理解，很易误 导。本刊不得不在审稿时要求作者说清楚，来稿中 所说的灵敏度的确切含义是什么，是怎样做实验得 出结果的。好在今年对前列腺特异蛋白检测的标 准化已有了说法，这样针对微量蛋白的分析灵敏度 也就明确了。以下介绍的内容和核酸检测方法灵 敏度的理解可能有差别，但是原则应是一致的。

一、分析灵敏度（检测限）

!,可检测的最低分析物浓度为检测系统的分析灵敏度或称检测限。这个浓度限值对毒品检验 在法庭上特别重要，希望通过检测知道样品中究竟有无药物，这是很关键的。另外，肿瘤标志物及许 多特定蛋白应该有一个可检测的最低浓度或某个量；如：前列腺特异蛋白（-.*），这是病人治疗后监 视复发的重要信息；长期来，临床对报告的前列腺特异蛋白究竟有意义的最小量要求予以明确。核 酸检测报告的阴、阳性也要求说明，能检出的最小 拷贝的核酸量或相当于多少病毒。因此，确定检测系统的可报告低限是重要的分析性能。

$,当前，检测限术语混乱。厂商使用各种词 语，如：灵敏度，分析灵敏度，最小检测限（92129:9;030832<1729#23），功能灵敏度，检测限度，定量限度 等。迄今尚无标准定义，所以有必要了解每个词语 的实际含义和确定这个含义的实验方式，怎样处理数据，怎样由数据作出估计，以及这个估计对该检 验的医学应用是否有用。以下介绍的分析灵敏度分为具有定性含义的检测低限，和具有定量含义的生物检测限及功能灵敏度。

二、检测低限

每次检测，总是做一个空白样品。检测方法常 以空白响应量校准至零点，再检测各个检测样品的 反应响应量。这些样品的反应响应量在扣除了空 白样品响应量后，是分析物的对应响应量。但是， 空白响应量也有波动。若重复多次作空白检测，以 空白（响应量）均值和标准差表示这些空白响应量 的平均水平和所有空白响应量对于空白均值的离 散程度指标。在确定方法性能或绘制标准曲线时， 常常以空白均值表示空白响应量。实际工作时，每 次只做一个空白，这个空白响应量各有50%的可 能性，大于或小于空白均值。当空白响应量小于空白均值，对同一个样品检测响应量（未扣除空白响 应量），似乎反映分析物要多一点，检测方法好象灵敏些。当空白响应量大于空白均值，似乎原先可以 检测出来的分析物现在测不出了。因此，检测方法必须说清楚：究竟怎样才算是可检测出来的分析物 量？标准曲线从零开始，是不是报告的分析物量可 以从零开始？这就是检测低限要回答的问题。统计说明，如果空白响应量的波动服从正态分布规 律：各个单次检测的空白响应量!空白有95%的可 能性为：

其中较空白均值小的一半会使分析物更易检 测出来，这不是检测不出，不必考虑。若有一个检 测响应量较空白响应量均值大$#空白，仍然认为是 空白响应量的可能性只有5%；有95%的可能性属于样品内有分析物形成的检测响应量；它较空白均值差!!空白 以上。同理，响应量较空白均值相差 "!空白以上的，还认为是空白响应量的可能性仅 #$"%；而有&&$’%的可能性是样品内有分析物形成的响应量。所以若检测样品的反应响应量较空 白均值大的，但和空白均值相差!!空白 或"!空白 以下的，只能说这些响应量是空白样品单次检测的响 应量，样品内没有分析物，或者表示：分析物量为零。超过!!空白或"!空白的响应量才认为样品中真 的含有分析物。

检测低限定义为样品单次检测可以达到的检 测响应量对应的分析物量。检测系统或方法对小 于或等于检测低限的分析物量只能报告“无分析物检出”。通常估计95%或99.7%的两种可能性：

要注意的是，直接读出浓度单位的检测系统对 低于零的检测将报告零，其分布不是正态的，因此 计算的均值和标准差不能如实表达检测低限的真 实情况。若检测响应可以初始值表示，如：吸光度、 荧光、等，此时!空白是有效的。所以应使用初始值来计算均值和标准差，然后再转换成浓度单位。

三、生物检测限度

大于检测低限的响应信号说明这个样品内有 分析物，但是方法还不能正确报告定量结果。因为 在这样低的浓度或其他量值的范围内，单次检测样 品的反应响应量重复性较差。那么在多少检测响 应量时才能较好地报告定量结果呢？现介绍两种 方式：生物检测限度和功能灵敏度。原则上，对多 个近于检测限浓度的样品（肯定不是空白样品）作 重复检测，对扣除了空白响应量后的样品检测响应 量以均值和标准差归纳。按正态分布规律，单次检 测样品具有的响应量有95%或97’%的可能性和 检测响应量均值相差!或"倍的响应量标准差。较均值还大的单次响应量肯定没问题；但是较均值 小的那些单次响应量，若和检测低限（空白响应量上限）交叉，说明检测方法还不能单凭一次检测区 分出这是空白还是有分析物。因此，这些样品检测响应量的95%或97’%单次检测量最低值也较检 测低限大，这样就可保证样品在任何情况 下，单次检测响应量一定不是空白的响应量；这个样品具有的分析物浓度可以定量地报告出来。在多个近于检测限的样品中，符合这样条件的最低分 析物浓度（或其他量值）就是检测系统或方法的生物检测低限。

生物检测低限定义为：以检测低限加!或"倍检测限样品标准差的方式，确定检测系统或方法可 定量报告分析物的最低浓度或其他量值的限值。生物检测低限的具体度量方式为：

本词语较完善地表示实际样品的检测限度， 如：什么浓度才是和零值或没有分析物有差异。在 证实厂商的+)*说明时，应使检测限样品的浓度 和厂商的说明相同。

四、功能灵敏度

功能灵敏度定义为：以天间重复 => 为!#%时对应检测限样品具有的平均浓度，确定检测系统 或方法可定量报告分析物的最低浓度或其他量值 的限值。为了估计69，须用多个检测限浓度来确定在低浓度处的精密度表现，从中选择具!#%=> 的浓度。在证实厂商的69的明时，使用的检测限样品浓度应和厂商的说明相同。

五、实验须考虑的因素

一般制备两种不同类型的样品。一个是“空白”样品，即不含有分析物，分析物浓度为零。另一 个是“检测限”样品，即含有低浓度的分析物。在有些场合下，需要制备几份“检测限”样品。空白和检 测限样品由检验方法作重复检测。计算各自的均 值和标准差。不同的检测限由空白和检测限样品数据计算出来。

1.空白液：一份空白液用作空白，其他用于制 备检测限样品。理想的空白液应具有和检验的病 人样品相同的基体。但是，常使用检测系统的系列梭准品中的“零标准”作为空白。对某些项目，可使 用术后已无某疾病的病人样品（如：前列腺肿瘤术后病人的无@9A血清）为空白样品。

2.检测限样品：在证实某方法的灵敏度性能 时，对空白液加入分析物配制成检测样品。加入的 分析物量应是厂商说明的检测浓度。在建立检测限度时，有必要制备几份检测限样品，它们的浓度 应界于预期检测限度高低一些的范围内。重复检测数：没有具体规定，但常推荐做10次。符合临床 检验对重复检测实验的要求。厂商常推荐20次，为减少开支。实验室也常采纳作10次。

3. 实验需要的时间：如果主要从空白液的重复 性了解检测低限，常常就做批内或短期实验。如果主要从“检测限”样品的重复性了解定量的检测限， 推荐作较长时间的实验，代表天间测定性能。实际就做10次检测（10d）