微生物学实验室常用培养基

临床医师

一、液体基础培养基

1.蛋白胨水

[用途]

用于细菌靛基质试验；一般细菌培养和传代。

[配法]

蛋白胨（或胰蛋白胨）10g，氯化钠 5g，蒸馏水1L。

将上述成分溶于水中，校正pH 至7.2,分装试管，每管2~3ml，置121℃灭菌15min备用。

[质量控制]

大肠埃希菌生长良好，靛基质阳性；伤寒沙门菌生长良好，靛基质阴性。

2.营养肉汤

[用途]

一般细菌的增菌培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。

[配法]

蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1L。

将上述成分称量混合溶解于水中，校正pH至7.4，按用途不同分装于烧瓶或试管内。经121℃灭菌15min，作无菌试验后冷藏备用。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌生长良好。

[保存]

置冰箱3周内用完。

3.牛肉浸液培养基

[用途]

细菌培养最基础的培养基，除用于一般细菌的培养外，又可以作营养琼脂及其它培养基的基础。

[配法]

新鲜除脂牛肉 500g，氯化钠5g

蛋白胨10g，蒸馏水1L。

先将牛肉清洗，除脂肪、肌腱，并切块绞碎。称取500g置容器加入蒸馏水1L，搅匀后置冰箱过夜，次日煮沸加热30min，并用玻棒不时搅拌用绒布或麻布进行粗过滤，再用脱脂棉过滤即成。在过滤中加入蛋白胨10g、氯化钠5g溶解后，用氢氧化钠溶液校正pH至7.6~7.8，并加热煮沸10min，补充蒸馏水至1L，最后用滤纸过滤，呈清晰透明、淡黄色液体，经121℃15min灭菌备用。

[用法]

根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其它培养基。如制作固体培养基，加入琼脂15 ~20g/L即可。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。

[保存]

置4℃冰箱内可以使用较长时间。

注:商品牛肉浸膏粉，一般使用量为3～5g/L。

二、固体基础培养基

1.营养琼脂

[用途]

一般细菌和菌株的纯化及传种。 [配法]

蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂粉（优质）12g，蒸馏水1L。

将上述成分(除琼脂外)溶于水中，校正pH 7.2～7.4后加入琼脂，煮沸溶解，根据用途不同进行分装，经121℃灭菌15min，倾注平板或制成斜面，冷藏备用。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌菌落呈浅黄色； 痢疾志贺菌菌落无色；铜绿假单胞菌 菌落无色或浅绿色。

[保存]

置4℃冰箱保存，2周内用完。

2.血琼脂培养基

[用途]

一般病原菌的分离培养和溶血性鉴别及保存菌种。

[配法]

pH 7.4~7.6牛肉浸液琼脂 100ml，脱纤维羊血(或兔血) 5~10ml。

将血琼脂基础经121℃灭菌15min，待冷却至50℃左右以无菌手续加入羊血，摇匀后立即倾注灭菌平皿内，待凝固后，经无菌实验冷藏备用。

[质量控制]

化脓性链球菌ATCC 19615生长良好，β-溶血；肺炎链球菌ATCC 6303生长良好，α-溶血；表皮葡萄球菌ATCC 12228 生长良好,不溶血。

[保存]

置4℃冰箱，1周内用完。

3.巧克力琼脂培养基

[用途]

主要用于嗜血杆菌的分离培养，亦可用于奈瑟菌的增殖培养。

[配法]

鲜牛肉浸出液1L， 蛋白胨10g,

氯化钠5g，琼脂粉12g，无菌脱纤维

羊血或兔血100ml。

将上述成分（除兔血外）加热溶解，调pH至7.2，置121℃15min高压灭菌，待冷至约85℃，以无菌方式加入兔血，摇匀后置85℃水浴中，维持该温度10min，使之成巧克力色。取出置室温冷至约50℃，倾注平板或制成斜面备用。

[质量控制]

流感嗜血杆菌ATCC 10211、肺炎链球菌ATCC 6305生长良好，菌落典型。

[保存]

置4℃冰箱，1周内用完。

4.胱氨酸胰化酪蛋白琼脂

[用途]

常用于测定脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌以及营养要求较高细菌的糖发酵试验。

[配法]

胱氨酸0.5g, 胰化酪蛋白20g,氯化钠5g，亚硫酸钠0.3g，琼脂3.5g，酚红0.0175g，蒸馏水1L。

将上述成分（酚红除外）混合溶解，调pH至7.2，加入酚红指示剂。分装试管，115℃灭菌15min。

[用法]

用于测定糖发酵时，按需要加入各种糖溶液，将待检标本直接种于培养基管内，置35℃孵箱，18~24h观察结果。培养基由红色变为黄色为阳性，不变色为阴性。