降钙素原检测方法学和临床意义的研究进展

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摘要：降钙素原(PCT)是降钙素的前体肽，是近年来发现全身严重感染性疾病的标志物，在细菌所致炎症或感染性疾病中可特异性升高。尤其对败血症、脓毒症、全身严重细菌感染、细菌性与非细菌性的鉴别及其他感染性疾病的早期诊断和鉴别诊断、治疗中抗生素的合理使用及预测疾病的预后方面有重要的作用。与其他传统实验室指标相比，在诊断细菌感染性疾病中PCT有更好的特异性，是一个非常有应用价值的诊断感染状态的微生物学指标。PCT在多种感染性疾病的早期快速诊断、鉴别诊断、病程监测、指导用药等方面发挥着重要作用。其检测方法发展迅速，可进行快速定性或准确定量检测。

降钙素原(PCT)是降钙素的前肽，是一种无激素活性的糖蛋白，也是一种内源性非类固醇类抗炎物质，多在细菌感染时诱导产生，在调控细胞因子网络中发挥着重要作用。近年来，PCT已作为系统性炎性反应综合征、脓毒症、急性呼吸窘迫综合征等疾病的预警指标。因此，受到临床与检验界学者的密切关注，但是它的存在还有很多争议。本文现就其临床意义和检测方法的进展作一综述。

1 PCT检测的临床意义

1．1在败血症中的应用 败血症指感染引起的全身炎症反应综合征，在国外每年有75万败血症患者，超过21万(28％)死亡，是ICU中主要的死亡原因。在我国尚无确切的统计报道J。根据败血症的严重程度分为3级：败血症、严重败血症和败血症性休克。随着严重程度的上升，死亡率也相应升高。在败血症时，感染的传统临床症状和常规实验室检测(如CRP或白细胞计数)缺少诊断的准确性，且有可能误诊。PCT相对于其他指标，其诊断的准确性不会受外界影响，与之相比，PCT在感染时升高更早，因此PCT在诊断感染引起败血症时有更高的准确性，在感染发生后3～6h，即可检测到PCT水平升高，在预后方面，CRP和白细胞计数对于患者的预后缺乏相关性，PCT水平可以用来对败血症的预后进行预测，若PCT水平持续升高或一直维持在比较高的水平，常常提示预后不良；若PCT水平快速降低至正常水平，常提示预后良好。国外学者研究发现PCT对诊断新生儿垂直传播败血症有很高的价值，患儿PCT在出生12—24h明显高于出生时及出生后36—48h，且可能是与新生儿复苏及绒毛膜羊膜炎独立相关]。

1．2在脓毒症、全身严重细菌感染中的应用 脓毒症是重症监护室最常见的严重疾病之一，是引起全身炎性反应综合征、多器官功能障碍综合征的常见原因，也是致残、致死率非常高的疾病之一。吴丽娟等发现，脓毒症患者PCT值明显高于非脓毒症患者，认为PCT优于目前临床上应用的炎性反应指标，可作为早期鉴别全身感染，尤其是细菌感染的快捷、敏感、准确的检测手段。在全身严重感染时，大多数经典的炎症早期因子仅仅暂时或问歇性的增高，国外研究发现，体温、白细胞计数、单核细胞HLA—DR表达量及血浆CRP、TNF一仅、IL-6、PCT与脓毒症预后相关，并经过统计分析在严重感染和脓毒症的辅助诊断中PCT是最好的指标，也可作为脓毒症的一个早期标志物。同时有专家指出PCT浓度与脓毒性休克、血培养结果有着显著的相关性，高浓度PCT可以从系统性炎性反应综合征及不同程度感染阶段分辨出脓毒性休克。在新生儿脓毒症辅助诊断方面，PCT是一个具有高度特异性和敏感性的新指标。国外报道J，在新生儿出生后0—48h内，PCT对脓毒症辅助诊断敏感性、特异性最为准确，可以通过PCT对其确诊，3—30d内辅助诊断敏感性和特异性的准确性为100％。

1．3在细菌性与非细菌性炎性反应鉴别中的应用 大量临床研究表明，在细菌引起的全身性炎性反应时，血清PCT浓度会出现明显增高，但在病毒感染、自身免疫性疾病、器官移植排斥反应等炎性反应时，血清PCT浓度仅维持低水平，提示血清PCT浓度可以鉴别诊断细菌性或非细菌性炎症。国外发现，单纯性HIV感染患者PCT浓度正常，HIV合并继发细菌感染患者PCT浓度则明显升高J，在脓毒性铜绿假单胞菌感染与脓毒性流感嗜血杆菌感染相比较，发现PCT浓度在脓毒性铜绿假单胞菌感染中升高显著，继发细菌感染患者在抗微生物治疗后血浆PCT迅速降低]。国外报道，在细菌性脑膜炎患者中PCT浓度升高明显，而在病毒性脑膜炎患者中的PCT浓度维持低水平，PET对细菌性脑膜炎的辅助诊断敏感性与特异性明显，PCT在鉴别诊断儿童细菌性脑膜炎与非细菌性脑膜炎时是非常敏感、特异的指标J。有研究显示，肺结核和细菌性社区获得性肺炎患者血清PCT浓度有显著的差别，它的高敏感度及阴性预测值对于从细菌性社区获得性肺炎中区分和排除肺结核起到一个重要的补充作用。除了细菌感染外，疟疾患者PCT水平也会升高。即使在没有神经系统合并症的疟疾发作时PCT的水平也常常升高，在疟疾患者体内PCT水平升高的原因可能是因为TNF．水平升高。因为已知大量的PCT产生是在TNF一仅在人体内释放后…。

1．4在其他疾病中的应用 下呼吸道感染如急性支气管炎，慢阻肺急性发作，哮喘，社区获得性肺炎占世界范围内发病率和死亡率的10％。国外报道在下呼吸道感染中常规使用抗生素治疗和以PCT作为指导抗生素治疗的指标…，均可降低抗生素的使用，在急性支气管炎和慢阻肺急性发作时尤其显著。国外学者研究发现，PCT在一个多中心实验中被认可是唯一显著独立预测急性感染性心内膜炎的指标。PCT是急性心肌梗死(AMI)的一个敏感的血液学指标，可能与AMI的炎症过程有关。国外报道无AMI并发症患者的PCT浓度水平均正常，当合并肺水肿和心源性休克时血浆PCT水平稍微增高，在心脏停搏或伴细菌感染后显著增高。PCT在创伤和手术时血浆PCT浓度通常不升高或仅轻微升高；胃肠道手术及严重多发伤和烧伤病人通常在术后或伤后2d内出现暂时性升高，可能是肠道内毒素移位所致，若不并发细菌感染、脓毒症和多器官功能障碍综合征，则PCT浓度很快下降。术后或伤后并发细菌感染，PCT则一直保持高水平或持续升高，若感染和脓毒症得到根除和控制，很快下降至正常水平。国外有学者发现在感染坏死性胰腺炎时PCT、IL一8均值明显高于无菌坏死性胰腺炎，相比之下，PCT与感染坏死性胰腺炎最为相关。严重细菌感染时血清PCT浓度不仅明显升高，并且与严重程度密切相关。PCT对诊断感染有指导意义，尤其对重症感染诊断价值更高。也有报道应用敏感抗生素治疗感染性休克PCT会迅速下降，说明血清PCT含量监测对感染性休克早期诊断和疾病发展的监测及治疗具有重要意义，可作为感染性休克早期诊断指标之一_1。

2PCT的检测方法

2．1放免法该方法检测 正常人的血清PCT较为敏感，其既能检测游离的PCT，又能检测结合型的PCT，也可检测降钙素基因相关肽前体，可信敏感度为4ng／L，线性范围10—77ng／L，50％的结合游离比为140ng／L。该方法是利用由人工合成的57个氨基酸部分制成R2B7特异性多克隆抗体，R2B7直接作用于PCT的57个氨基酸部分，既能检测游离型PCT，又能检测结合型PCT，其检测灵敏度为4g／L，比酶免法、免疫化学发光法提高了灵敏度，但所需时间较长，且标记的放射性元素存在污染，因而限制了此方法的临床应用。

2．2免疫荧光法 此方法是一种定量的免疫学检测方法。采用两种鼠单克隆抗体与PCT的两个不同的抗原结合位点(CT和下钙素)结合，一种抗体经荧光标记(示踪剂)固定在管壁上，两种抗体分别与血浆或血清中PCT分子结合，形成“夹心复合物”。荧光标记抗体被缚在试管壁上，通过发光试剂，计算荧光标记物的含量。荧光信号的强度与标本PCT浓度成正比，同时测定已知PCT浓度的标准品，制成标准曲线，从而定量得到标本的PCT浓度。

2．3免疫化学发光 该方法采用胶体金免疫层析技术，在标准品上结合有胶体金(示踪)的小鼠单克隆抗降钙素抗体和绵羊多克隆抗降钙素抗体，待检标本加上后，示踪元素即与标本中的PCT结合，这样标记的抗原抗体复合物就结合到固定的抗降钙素抗体上，形成一个“三明治式”的复合物，然后通过发光比色判断出PCT的浓度。该方法比较特异，无交叉反应，其检测最低限为10ng／L，标准曲线线性范围为10—60ng／L。批内、外变异系数分别为7％和8％，整个检测过程可以在2h完成。

2．4金标法 近年来，实验室多采用一种半定量检测PCT的金标法用于PCT的检测，是专门制备好的PCT．Q检测卡，简便快捷，整个检测过程不超过30rain，结果分为<0．5gL；≥O．5e,／L；≥2．0WE和≥10g／L4个等级。正常人清PCT值<0．1g／L，大多数文献以≥0．5g／L为阳性阈值。实验应用一个金标单克隆鼠抗．kmac~cin(一种降钙素原降解产物)抗体(示踪物)和一个多克隆羊抗一降钙素抗体(固相)。血标本经离心后取20l血浆或血清滴入反应孔中先与示踪物结合形成明显的抗原抗体复合物，该复合物经虹吸作用通过观察区再与固定的抗一降钙素抗体结合形成夹心复合物。当标本中的PCT浓度≥0．5g／L时，夹心复合物呈红色带，且颜色深浅与PCT浓度成正比例。此法不依赖仪器、操作简便、快速，适用于床旁检验。2．5酶免法以及其他检测方法此方法是采用双抗体夹心法，用人工合成的PCT单克隆抗体检测，方法较特异，无交叉反应，检测最低限为1O斗L，但对正常人血清中PCT浓度不能检出；凝胶层析法以及高效液相色谱分析法，这两种方法检测结果精确，但比较耗时，费用昂贵，因此限制了它们在临床的应用。

3展望

PCT作为一种新的感染性炎性标志物目前已被广泛认可。它不仅与系统性细菌感染程度呈现一种正相关的关系，而且它的上升或下降直接反映疾病恶化或好转的趋势，但在局部感染时PCT不升高或仅轻度升高。虽然有很多临床与检验界学者的密切关注，但在不同的病理情况下，其确切的产生机制还不甚明了，其病理、生理特点还不完全清楚，有待于进一步的研究。它可能成为一项快捷、有效的常规实验指标，帮助临床诊断、鉴别诊断、疗效观察与指导用药，以使患者能够早日恢复。

在检测方面，血液学检查和传统的实验室指标如急性期蛋白对感染性疾病不能做出可靠的诊断。微生物检查结果需等几天的时间而且阴性结果并不能排除l临床感染的存在以及与此相关的高病死率。PCT是一种改进的实验室指标，它随着免疫学和分子生物学技术的发展，它的检测方法也在不断更新与完善。对感染性疾病的诊断具有高度的灵敏度和特异性，同时也可用于对治疗结果的评价。随着其在临床应用的越来越多，相应的质量控制和质量保证工作也将逐渐受到重视。PCT的检测在相关疾病的诊断和预后判断等方面可能还会发挥更大的作用。