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cc530
求助:实验做细菌胶体金试纸条,阴性对照为PBS时有假阳性出现,把PBS换成TBS后假阳性消失,帮忙分析一下为什么会这样。。(PBS7.4,0.01M,TBS7.4,0.05M),急求~~~
numbrg
这个问题遇到过,估计你的体系太疏水,测PBS假阳应该是伴随着金样分离的现象吧,而TBS没有分离也就没有假阳,你在PBS中加表活也能消除此种假阳。
Tris是制备表活的原料,应该是具有表活的性质,所以Tris缓冲液就相当于PBST了,这是我的猜测,不知道对不对,有没有人来解答一下?
ashafriend
这个太正常了……五花八门各种,如果只是做对照用的话,就换个别的缓冲体系算了,我还遇到过加了PBS后死金的,更郁闷。
关键你的试纸条是啥系统的,尽量别交叉,交叉后假阳、假阴、增强都有可能发生。
cc530
我的金标抗体体系是tris-hcl7.4的体系,那意味着我整个体系,不管是样品垫还是金抗保存液都用统一的Tris-HCL的体系吗?谢谢了。
cc530
用PBST或者TBST都只是阴性对照,那照这样的话,我是不是应该在我实验的试纸条体系里都增加表面活性剂呢?增加的话,我应该在样品垫处理液里加还是金标抗体重悬液里加?哦,还有,X-triton100是不是要比吐温20效果好些呢?谢谢了。
booze
X-triton100重复性不好
cc530
今天根据您的指点,做了两次,吐温20从0.5%、1%、2%、3%、5%,点样滴加7.4的PBS的T线假阳性颜色强于7.4的PB>强于7.4的PBST>强于7.4的TB>强于8.8的TB>强于6.8的TB;基本上8.8和6.8的TB在吐温20浓度≤2%时为阴性,但随吐温浓度增大时,整个体系的假阳性呈增强趋势,急求帮忙分析一下,谢谢各位了前辈了。
numbrg
吐温用不了那么高,1%以内就可以了,高了有可能造成金和蛋白的解离,造成裸金,就会出假阳。 |
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