体外诊断试剂开发干扰因素分析（2）

千姿百态

干扰物是临床实验室检测误差的一个很重要的来源，它们在某种程度上对病人来说表现为一种危害。常规工作中精密度通过室内质控监控，准确性通过与参考物质作比较试验进行验证，但实验室不能很容易的检测干扰物质引起的误差。

广义上干扰物质是导至分析能读或催化活力出现偏移的物质，因此，干扰物质通过干扰作用来影响分析特异性，从干扰物来源，干扰作用分为内源性和外源性干扰。

上次我们分享了内源性干扰的一些相关物质，今天我们接着谈谈其他的干扰因素。

01

内源性干扰物质（续篇）

溶菌酶（lysozyme）

溶菌酶（lysozyme）又称胞壁质酶（muramidase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-acetylmuramide glycanohydrlase），是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导至细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。

溶菌酶可与等电点较低的蛋白有强的结合能力。免疫球蛋白等电点约为5，因此，在双抗体夹心法测定中，溶菌酶可在包被的IgG和酶标的IgG间形成桥接，从而导至假阳性或假增高结果。

排除方法：

为保证免疫测定的可靠性，有必要从标本中去除溶菌酶或将其封闭，Cu2+离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶，防止其联接IgG。

抗试剂成份的抗体

抗链霉亲合素抗体（anti-streptavidin antibodies）：链霉亲合素(streptavidin）是由Streptomyces avidinni 产生的，机体为什么会出现抗链霉亲合素抗体的原因目前尚不清楚。

1、抗钌抗体（anti-ruthenium antibodies）；

2、被动获得的外源抗体或抗原；

3、静脉输注免疫球蛋白获得抗病原体的抗体（如抗梅毒抗体、抗-HCV、抗-HBs等）；

4、新生儿获得的来自母体的特异IgG；

5、新生儿获得的来自乙肝“大三阳”母亲的HBeAg。

交叉反应(cross reaction）

交叉反应是两种来源不同的抗原，彼此之间可以有相同的抗原决定 簇，由此决定簇刺激机体产生的抗体不仅可 分别与其自身表面的相应抗原表位结合，而 且还能与另一种抗原的相同表位结合发生反 应，称为交叉反应。

交叉反应现象的形成可能与下列因素有关：

1、共同抗原，不同生物体的某些生物大分子具有相同的抗原结构；

2、共同表位，不同的生物大分子的某些片段(肽段)具有相同的表位；

3、相似表位，不同的生物大分子，其表位的部分空间构象十分类似，可以和同一种抗体的互补决定区相契合。

生物素（biotin）

生物素又被称为维生素 B7或维生素H，是一种水溶性B族维生素。生物素的缺乏主要会损害皮肤、粘膜和神经系统，在普通人群中长期的生物素缺乏可能导至毛发、指甲、皮肤的损害。

生物素-亲合素系统是上世纪70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。现被广泛应用于医学各领域。在体外诊断的实际应用中更是具有巨大的优越性，生物素可与几乎所有生物大分子结合，亲和力高，结合稳定，灵敏度高，具有多级放大作用。

生物素干扰存在于使用生物素-亲和素系统或生物素-抗生物素系统的检测中。与仪器厂家、仪器型号、发光底物无关，同一厂家不同项目包被方式也可能不同。生物素对化学发光产生干扰需要一定的浓度，不同项目/试剂抗生物素干扰的能力不同。生物素干扰可能产生假阳性，也可能产生假阴性。一般来说，夹心法产生假阴性，竞争法产生假阳性。

使用了生物素-链霉亲合素（ streptavidin-biotin）系统的检测系统：

1、Access, DxI and DxC (Beckman Coulter)；

2、Elecsys, Cobas and Modular platforms (Roche Diagnostics)；

3、Isys platforms (Immuno Diagnostic System)；

4、Ortho Vitros platform (Ortho Clinical Diagnostics)；

5、Dimension Vista, Exl, Immulite platforms (Siemens Healthineers)。

02

外源性干扰物质

溶血（Hemolysis）

溶血（Hemolysis） 红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。可由多种理化因素和毒素引起。在体外，如低渗溶液、机械性强力振荡、突然低温冷冻（-20℃～－25℃）或突然化冻、过酸或过碱，以及酒精、乙醚、皂碱、胆碱盐等均可引起溶血。

标本溶血时可释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导至非特异性显色，干扰测定结果。

解决方法：

1、标本采集和处理时必须注意避免溶血；

2、避免标本被细菌污染。细菌菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，在ELISA试验中可产生非特异性显色而干扰测定结果；3、避免标本保存时间过长。部分项目因稳定性时间较短，需严格注意标本保存时间，（附：部分项目名称及建议保存时间）

NSE（神经原特异性烯醇化酶）

24小时（15-25°C  6小时）

S100（S100蛋白）

2天（15-25°C  8小时）

HE4（附睾蛋白4）

2天（15-25°C  6小时）

ProGRP(胃泌素释放前体)

72小时（20°C  9小时）

Folate（叶酸）

2天（20-25°C  2小时）

Insulin（胰岛素）

24小时（15-25°C  4小时）

C-peptide(  C肽)

24小时（15-25°C  4小时）

标本凝固不全

血液采集后，如收集管中无促凝剂和抗凝剂，则血液通常在半小时后开始凝固，18~24h完全凝固。日常检验中，常在血液还未开始凝固时即离心分离血清，此时因血液没有完全凝固，离出的“血清”并非为完全的血清，其中仍残留部分纤维蛋白原，易形成干扰，造成假阳性。

解决方法：

血液标本采集后，应使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。

样本离心时间

个别标本由于离心制备不彻底，造成假阳性结果，如果忽略掉就会给临床造成误诊，引起不必要的医疗纠纷。故建议检验人员若遇到疑似阳性标本，最好延长离心时间，重复测定，可以降低假阳性率，增加检验结果的准确性。

结论

干扰物质影响分析特异性，检验工作者在日常工作中需格外注意，必须减少样本中的干扰物质，避免对测定结果产生影响。

[url=]来源：博茵生物[/url]

老三

“胆碱盐易造成溶血”，请问这个有什么说法不？