免疫诊断——5μm链霉亲和素磁珠使用说明书

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【产品名称】5μm链霉亲和素磁珠

【产品型号】MPS550/StreptavidinC5

【目 录 号】ST04

【产品介绍】

EnrichingBeads® 链霉亲和素磁珠以免疫诊断磁珠为基础，将重组链霉亲和素共价偶联到形态规整、粒径均一的磁性聚苯乙烯微球表面形成单分子固定层，可用于生物素化核酸、抗体或其他生物素化配体和靶分子的分离和检测。形态确定的特异性表面便于进行高效捕获、分离和下游操作，批次一致性和结果的可靠重复性得到保证。

【规格&参数】

平均粒径	5μm
固形物浓度	10mg/mL
分散液	PBS, pH  7.4, 0.1%BSA,0.02%NaN3
游离生物素结合量	>900pmol/mg
生物素化寡核苷酸结合量	~200pmol  ss-oligonucleotides/mg
生物素化抗体结合量	~10μg /mg

【产品特点】

l   生物素结合位点丰富；

l   非特异性吸附低。

【作用对象】适用于生物素标记的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体液相捕获。

【有 效 期】两年（2~8 ℃保存）。

【试剂准备】

1. 核酸捕获

- B&W Buffer (2X)：10mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM EDTA, 2M NaCl；

- B&W Buffer (1X)：5mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.5mM EDTA, 1M NaCl；

2. RNA捕获：

- Solution 1：0.1M NaOH, 0.05M NaCl（DEPC处理）；

- Solution 2：0.1M NaCl（DEPC处理）；

3. 蛋白/抗体捕获：

- PBS Buffer, pH 7.4 (or PBST Buffer, PBS pH 7.4, 含0.01%(v/v) Tween 20；or PBS/BSA Buffer, PBS pH 7.4, 含0.1%(v/v) BSA)。

【耗材准备】ep管（如进行RNA捕获，请使用无RNA酶ep管），磁力架。

【操作流程】

1.    磁珠预处理

1.1根据【规格&参数】表中生物配体结合量参数，计算磁珠使用体积（建议最小使用量不要少于20ul，取样太少易导至不同次加入的磁珠体积不一致）；

1.2将磁珠重悬均匀（e.g.涡旋震荡30s，吹打或旋转混合5min。磁珠重悬方法下同），并转移所需要的磁珠体积至一支全新ep管中；

1.3加入等体积（或至少1mL）B&W Buffer (1X) （核酸捕获）或PBS Buffer（蛋白/抗体捕获），将磁珠重悬均匀；

1.4使用磁力架磁吸至磁珠吸附完全，吸弃上清液；

1.5重复step 1.3和1.4三次。

2.    DNA捕获

2.1向step 1.5 ep管中加入双倍原始磁珠体积的B&W Buffer (2X)；

2.2加入等体积的生物素化DNA的去离子水溶液至上述ep管中；

2.3室温温柔旋转混匀，孵育20~30min；

2.4磁性分离，吸弃上清液；

2.5使用B&W Buffer (1X)清洗上述磁珠-核酸复合物2~3次；

2.6直接进行后续核酸释放实验，或加入一定体积B&W Buffer (1X)重新分散、待用。

3.    RNA捕获

3.1向step 1.5 ep管中加入大于磁珠原始体积的Solution 1，涡旋振荡2min，磁吸并吸弃上清液（该清洗步骤操作两次）；

3.2使用Solution 2，按照step 3.1的方法，清洗磁珠1次；

3.3将磁珠重新分散于双倍原始体积的Solution 2中；

3.4加入等体积的生物素化RNA的去离子水溶液至上述ep管中；

3.5室温温柔旋转混匀，孵育20~30min；

3.6磁性分离，吸弃上清液；

3.7使用Solution 2清洗上述磁珠-核酸复合物2~3次；

3.8直接进行后续核酸释放实验，或者加入用一定体积Solution 2重新分散待用。

4.    蛋白/抗体捕获

4.1向step 1.5 ep管中加入一定体积PBS Buffer和生物素化的蛋白或者抗体溶液；

4.2室温温柔旋转混匀，孵育30min；

4.3 磁性分离，吸弃上清液；

4.4 使用PBS/BSA Buffer清洗3~5次；

4.5 用一定体积的PBS Buffer 进行保存。

5.    核酸或者蛋白的释放

5.1核酸释放

将step 2.6或3.8的ep管磁性分离吸弃上清液，然后用10mM EDTA, pH 8.2, 95%甲酰胺溶液在65℃下孵育5min（或者90℃下孵育2min），可以将生物素化核酸与磁珠实现分离；

5.2 蛋白/抗体释放

将磁珠与生物素化蛋白复合物用用0.1% SDS溶液煮沸5min可以将生物素化蛋白从磁珠上解离。

【其它】

该产品可配合英芮诚核酸提取仪（订货号ETP-300）进行自动化操作，也可以配合多功能磁力架（订货号CQT-0011）、16位磁力架（订货号CQT-0001）、手动磁性萃取指套（订货号CQT-0008）进行手动操作。

附1：洗脱条件参考表

洗脱温度和时间	洗脱溶液	洗脱效率
90℃ for 10min	10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.8%
90℃ for 5min	10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.4%
90℃ for 2min	10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.0%
65℃ for 5min	10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	96.4%
65℃ for 2min	10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	97.9%
37℃ for 10min	10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺	41.9%
90℃ for 10min	H2O	7.3%
90℃ for 10min	10mM  EDTA pH8.2	52.0%
90℃ for 10min	95%甲酰胺	35.9%
90℃ for 10min	30mM  NaOAc pH 9.0 95%甲酰胺	95.5%
90℃ for 10min	80mM  NaOAc pH 9.0 95%甲酰胺	97.3%
90℃ for 10min	140mM  NaOAc pH 9.0 95%甲酰胺	95.4%

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