蛋白抗体纯化——环氧基琼脂糖磁珠说明书

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【产品名称】环氧基琼脂糖磁珠

【产品型号】MAg25K/Epoxy

【目 录 号】P04

【产品介绍】

EnrichingBeads® 环氧基琼脂糖磁珠以交联琼脂糖为基质，拥有良好的刚性、磁响应性和单分散性，表面修饰有丰富的环氧基(-Epoxy)，能够与含氨基或者巯基的生物配体，如：蛋白质、抗体、寡聚核苷酸和药物分子等通过共价偶联的方法实现结合，是一种分子生物学和医学研究的重要载体工具。

【产品规格】

平均粒径	25μm
固形物浓度	10% (v/v) medium slurry
分散液	DMAC
表面配基含量	100~200μmol/mL纯磁珠(100% v/v)

【产品特点】

2 良好的磁响应性；

2 良好的物理化学稳定性；

2 丰富的配体特异性结合位点；

2 低非特异性吸附。

【作用对象】适用于含伯氨基或者巯基的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体。

【有 效 期】两年(2~8 ℃保存)。

【偶联准备】

1.     离心管，磁力架；

2.     反应缓冲液：0.1M PBS, pH8.5（适用于含半胱氨酸的蛋白）；0.1M NaCO3-NaHCO3,pH 10.5,（适用于不含半胱氨酸的蛋白）；

3.     清洗缓冲液：50mM Tris-HCl, 0.15M NaCl , pH7.2；

4.     封闭液：0.25M Ethanolamine, 0.1MTris-HCl, pH 10.5；

5.     需要偶联的目标蛋白、抗体、寡核苷酸等生物配体；

【操作流程】

1.     将磁珠混合均匀，取1mL磁珠(10%,v/v)加入到2mL离心管中，磁性分离去除上清液。

（注：“磁性分离”指将离心管置于外加磁场中，至磁珠吸附完全，约需要30s。）

2.     加入1mL去离子水，混合均匀，磁性分离去除上清液（重复2次）；

3.     加入500~1000μL反应缓冲液，混合重悬磁珠，磁性分离去除上清液（重复2次）；

4.     加入200~500μg抗体或者蛋白质溶液（提前用500μL反应缓冲液溶解），室温旋转混合12~16hr（37℃反应12hr 效果更好），磁性分离去除上清液；

（注：若偶联生物多肽或者寡核苷酸，请加入0.1~2μmol样本）

5.     加入1mL封闭缓冲液，室温旋转混合3hr（37℃反应效果更好），磁性分离去除上清液；

注：此步骤也可以用0.2%BSA分散于结合液中进行封闭处理；

6.     （选做）用0.5 M NaCl, 0.1 M的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、0.5 M NaCl, 0.1 M的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤（重复交替清洗3次）；

注：此步骤可在最大程度上去除非特异性结合抗体；

7.     加入1mL清洗缓冲液，混合重悬磁珠，磁性分离去除上清液（重复3次）；

8.     将上述磁珠分散于0.5mL PBS, pH 7.4短期保存，或分散于PBS, pH 7.4, 0.1%BSA,0.02%NaN3长期保存。

【注意事项】

1.    偶联过程中不应含有除目标配体外含伯胺基团的物质，如：甘氨酸、BSA、Tris-HCl等，请注意您的抗体溶液是否含有上述物质；

2.    磁珠使用和保存过程中应避免反复冻融；

3.    环氧基琼脂糖磁珠不可干燥；

4.     不同抗体和蛋白与环氧基琼脂糖磁珠的结合能力不同，客户可自行优化加入不同的抗体或者蛋白量；

【其它】

该产品可配合英芮诚核酸提取仪（订货号ETP-300）进行自动化操作 ，也可以配合多功能磁力架（订货号CQT-0011）、16位磁力架（订货号CQT-0001）、手动磁性萃取指套（订货号CQT-0008）进行手动操作。

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