蛋白抗体纯化——羧基琼脂糖磁珠说明书

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【产品名称】羧基琼脂糖磁珠

【产品型号】MAg25K/Carboxyl

【产品目录】P01

【产品介绍】

      Enriching Beads® 羧基琼脂糖磁珠以交联琼脂糖为基质，拥有良好的刚性、磁响应性和单分散性，表面修饰有丰富的羧基(-COOH)，能够与含伯胺基的生物配体，如：蛋白质、抗体、寡聚核苷酸和药物分子等通过共价偶联的方法实现结合，是一种分子生物学和医学研究的重要载体工具。

【产品规格】

平均粒径	25μm
固形物浓度	10% (v/v) medium slurry
分散液	H2O
表面配基含量	60~100μmol/mL纯磁珠(100% v/v)

【产品特点】

2 良好的磁响应性；

2 生物样品中良好的分散性；

2 良好的物理化学稳定性；

2 丰富的配体特异性结合位点；

2 高结合载量；

2 低非特异性吸附。

【作用对象】适用于含伯氨基的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体。

【有 效 期】两年(2~8 ℃保存)。

【偶联准备】

1.     离心管，磁力架；

2.     反应缓冲液：0.1M MES, 0.15M NaCl, pH6.0；

3.     封闭缓冲液：0.2% BSA, 0.1M MES, 0.15M NaCl, pH 6.0；

4.     清洗缓冲液：50mM Tris-HCl, 0.15M NaCl , pH7.2；

5.     需要偶联的目标蛋白、抗体等生物配体；

6.     偶联活化剂(EDC.HCl溶液)：用反应缓冲液配置为20mg/mL浓度，现配现用。

【操作流程】

1.     将磁珠混合均匀，取1mL磁珠(10%,v/v)加入到2mL离心管中，磁性分离去除上清液。

（注：“磁性分离”指将离心管置于外加磁场中，至磁珠吸附完全，约需要30s。）

2.     加入1mL去离子水，混合均匀，磁性分离去除上清液(重复2次)；

3.     加入500~1000μL反应缓冲液，混合重悬磁珠，磁性分离去除上清液(重复2次)；

4.     加入200~400μL反应缓冲液，混合重悬磁珠；

5.     加入200μL现配偶联试剂(EDC.HCl溶液)，室温旋转混合30min；

6.     加入200~400μg抗体或者蛋白质溶液(提前用500μL反应缓冲液溶解)，室温旋转混合12~16hr，磁性分离去除上清液；

7.     加入1mL封闭缓冲液，混合重悬磁珠，室温旋转混合2hr，磁性分离去除上清液；

8.     加入1mL清洗缓冲液，混合重悬磁珠，磁性分离去除上清液(重复3~5次)；

9.     将上述磁珠分散于0.5mL PBS, pH 7.4短期保存，或分散于PBS, pH 7.4, 0.1%BSA,0.02%NaN3长期保存。

【注意事项】

1.    偶联过程中不应含有除目标配体外含伯胺基团的物质，如：甘氨酸、BSA、Tris-HCl等，请注意您的抗体溶液是否含有上述物质；

2.    磁珠使用和保存过程中应避免反复冻融；

3.    羧基琼脂糖磁珠不可干燥；

4.     不同抗体和蛋白与羧基琼脂糖磁珠的结合能力不同，客户可自行优化加入不同的抗体或者蛋白质量；

5.     偶联过程无需移除EDC溶液，可适当提高EDC溶液浓度来提高偶联效率。

【其它】

该产品可配合英芮诚核酸提取仪（订货号ETP-300）进行自动化操作 ，也可以配合多功能磁力架（订货号CQT-0011）、16位磁力架（订货号CQT-0001）、手动磁性萃取指套（订货号CQT-0008）进行手动操作。

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