组织病理的三驾马车

病理医师 · 发表于 2017-9-3 16:20

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病理学技术包括传统病理学技术和现代新技术，传统的福尔马林固定，石蜡切片和HE染色技术仍然是病理学的基本技术，大量应用于基础和临床病理学日常工作中，保证和提高常规技术质量和现代设备水平十分重要。正如某院士指出的那样：“病理学的理论和技术被视为一辆车的两个车轮，缺一不可，互为依存，互相促进，两者的结合决定着病理学的发展。”

看看每天的组织切片，它是用福尔马林固定，石蜡包埋的切片，然后HE染色，这三匹马拉着病理这辆车，跑了一百多年，还是这三匹马。一百多年前就是这样，所以可能有人认为一百多年不会变了，就是个古老的分支了。可是在这中间，有人嫌福尔马林有味，用很多的液体代替福尔马林固定，结果呢？都没有成功。还有人用各种方法去包埋，不用石蜡，也没有成功。还有人用各种染料去染切片，最后也没有成功，最后还是HE染色最理想，你说怎么解释呢？像天外来人告诉你的方法，所以没有人能够超越的了。

一、甲醛固定

甲醛(Formaldehyde)：甲醛为一种无色气体，溶于水成为甲醛水溶液，极易挥发且具有强烈刺激气味，它在水中的饱和量为37~40℅（商品甲醛），甲醛水溶液即市售福尔马林。常用的福尔马林浓度为10℅商品甲醛，此液实际上为4℅甲醛。

甲醛水溶液渗透力强，固定均匀，对组织收缩较小，多用于大块组织固定，它能使组织硬化并增加组织的弹性。但经乙醇脱水时收缩很大。经它固定的组织，细胞核染色优于细胞质。用10℅甲醛液固定小块组织（1.5×1.5×0.2㎝）数小时即可时间稍长也无关系。随着温度的增高可缩短固定时间。但是，对于长时间固定的标本，需经24~48小时的流水冲洗，否则会影响染色。甲醛水溶液放置日久能产生少量甲酸，使溶液变为酸性，。严重时影响细胞核内嗜碱性物质的染色。因此，在备用的甲醛液中宜放入少量的碳酸镁或碳酸钙作为中和剂。甲醛水溶液为无色透明，若逐渐变为浑浊，表示以变性，不宜再用。

甲醛单纯固定液的几个常用配方：

（1）甲醛生理盐水液

37~40℅甲醛液 100ml

氯化钠 8.5g

蒸馏水至1000ml

（2）中性10℅甲醛液

37~40℅甲醛液 100ml

蒸馏水 900ml

碳酸钙或镁足量

（3）中性缓冲甲醛液（ph7）

37~40℅甲醛液 100ml

蒸馏水 900ml

碳酸二氢钠 4g

碳酸氢二钠 6.5g

（4）配制4%多聚甲醛固定液

多聚甲醛 40g

0.1M PB (PH 7.2–7.4) 1000mL

二、石蜡包埋

浸蜡、包埋的目的

组织经过脱水、透明后在熔化的石蜡内浸没的过程称浸蜡。包埋是使石蜡变硬并将组织包埋进去以利于切片和观察的过程。目的是去处组织中的透明剂而代之以石蜡，并浸入组织内部，把软组织变为适当硬度的蜡块，以便切成薄片。

浸蜡的方法

是将组织块经二甲苯透明后，经数次石蜡，使组织中剩余的透明剂完全去尽。透蜡时间根据组织类型及其大小而定，基本上与组织固定时间正比。通常的实验室常用的石蜡作为透蜡用。常用包埋蜡熔点为52~58℃。

浸蜡过程：一般厚度的实质性器官，总的浸蜡时间2~3小时。

包埋的方法

常规石蜡包埋法：在进行石蜡包埋时，先将熔化的石蜡倒人包埋框，尔后用加温的镊子将的浸蜡组织块放人。在石蜡中有杂物时应进行过滤后再使用。防止倒人的石蜡凝固，在包埋时随时熔化凝固的石蜡。包埋时首先注意有无特殊的包埋面（如分层组织，皮肤和内镜活检标本等）。包埋面必须平整，破碎的组织应采集平铺包埋。不要混入杂物。包埋温度不应过高，否则易造成组织块的烫伤，影响诊断。另外，包埋蜡的温度与组织块的温度应接近，不然会引起组织块与周围石蜡的脱裂。包埋一般用为56℃的石蜡，也应根据气温条件作相应调整，以组织块具有合适的硬度，能切出高质量的切片为标准。