试纸条PBS显色正常，检测样品颜色变灰紫色，死金

amanda燕尾蝶

问题描述：食品安全的条子，瘦肉精的项目。试纸条检测pbs时显色挺好，尿样显色正常，但是组织样品（水煮10min这种）一检测就死金，颜色发灰。
重悬液为含PEG的BB，金标垫处理液为：含BSA、糖、少量表活的PBs。样品垫处理液正在尝试中
分析原因：1.标记物不稳定，标记时封闭没做好？2样品中的成分影响？
尝试：1. 标记时，封闭时以10%BSA至终浓度1%进行封闭。尝试了在10%BSA的基础上添加0.1%，0.2%0.5%1%2%的casein。效果不佳，喷金时，金子很容易变紫色，真空干燥后，还变灰色了。换下一个
2. 样品中成分的影响，测过样品处理液pH，中性左右。样品垫中BSA/糖、NACL，pbs体系，TRIS,BB都尝试过没有改善。
3.重悬液的成分换过PBS体系，也没有改善

感觉重点可能在标记上，但是标记上封闭也用过PEG、BSA。。。没有明显的改善。

各路英雄大侠们，帮忙分析一下支支招吧！

martin_lic

组织煮10min后直接就加样了？

amanda燕尾蝶

martin_lic 发表于 2017-8-8
组织煮10min后直接就加样了？

冷却到室温后加样

martin_lic

amanda燕尾蝶 发表于 2017-8-9
冷却到室温后加样

你换不同材质的样品垫试试看，密度大一点的

amanda燕尾蝶

martin_lic 发表于 2017-8-10
你换不同材质的样品垫试试看，密度大一点的

怎么看密度大不大啊

martin_lic

amanda燕尾蝶 发表于 2017-8-10
怎么看密度大不大啊

吸水纸的密度就比玻纤大另外就是把样品垫的缓冲体系浓度提高点看看，你这个样品是用水直接煮还是混合缓冲煮，如果用水的话，你可以试试放在缓冲体系里头煮，然后再检测下

SPHERE-MFCIS

是个别组织样品死金还是大面积组织样品都是这样？

amanda燕尾蝶

martin_lic 发表于 2017-8-10
吸水纸的密度就比玻纤大另外就是把样品垫的缓冲体系浓度提高点看看，你这个样品是用水直接煮还是混合缓冲 ...

什么都不加，直接在水浴锅中煮。

martin_lic

amanda燕尾蝶 发表于 2017-8-17
什么都不加，直接在水浴锅中煮。

你的条子试试看单独用烧开的水加样，看是不是也是假阳，如果是的话，那就是体系的问题，可以考虑缓冲体系解决

amanda燕尾蝶

SPHERE-MFCIS 发表于 2017-8-16
是个别组织样品死金还是大面积组织样品都是这样？

大面积组织样品都这样子

SPHERE-MFCIS

大面积如此，最好先别考虑直接上样，可以考虑参照食品安全市面上大部分试纸的方式，样品前处理做的细致一些，脂溶性的干扰还是很强的，所以稀释这个步骤还是需要的

macro20

据楼主所描述，应该是组织中释放出的物质引起金标抗体的解离；1、优化样本处理方法；2、样品垫优化（貌似楼主已经坐过没效果）；3、更换抗体；