【液体活检应用再升级】CTC单细胞的高效富集与分离检测

长长的路

近日，QIAGEN新推出了一项基于AdnaTest CTC富集检测系统与QIAscout单细胞分离系统联合应用于CTC富集与单个CTC细胞的分离检测的新应用。

通过AdnaTest富集得到的CTC细胞，可以采用QIAscout系统实现单个特异性CTC细胞的分离，继而实现单个CTC细胞多个肿瘤标记物的进一步分析。

此项应用将极大提高单个CTC细胞分析的灵敏度和特异性，更好地应用于肿瘤研究。

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  背景介绍  

单细胞研究技术可以让我们更加深入、全面地了解肿瘤状态和行为，包括肿瘤的异质性、克隆群体的演化、肿瘤早期的入侵、上皮细胞间质转化以及转移过程。

通过研究特定CTC细胞，可以判断突变类型和频率，从而更好地了解肿瘤的耐药机制，为临床医生的诊断以及患者病情的监测提供科学依据。

众所周知，CTC细胞有多种类型，比如CK阳性CTC细胞、凋亡CTC细胞和小CTC细胞。因而分析单个CTC细胞可以获得更加详细的细胞特性，从而提高NGS或其他检测方法的灵敏度，降低结果的假阳性或假阴性。

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相关技术  

AdnaTest技术无需特殊设备，通过采用优化组合上皮细胞和肿瘤细胞相关的多个抗体，结合免疫磁珠颗粒去富集CTC。联合使用肿瘤细胞的不同抗体可以大大提高下游分析的灵敏度，有助于避免由于肿瘤细胞表面抗原表达高度变异性等因素带来的假阴性结果。

同时AdnaTest还联合采用RT-PCR技术对特定癌种的多个肿瘤标记物同时进行检测，为诊断结果的准确性提供双重保障。

QIAscout是一款理想的单细胞分离系统，分离得到的单细胞能保持细胞活性，可以用于下游NGS、PCR和其他实验应用。

QIAscout体积小巧，是一款能够满足多种应用需求且性价比超高的单细胞分离设备，可应用于肿瘤学、免疫学、神经生物学和干细胞生物学领域的单细胞分析。

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  应用举例

— 实验方案 —

• 材料：20个LnCAP95细胞被注射于5ml健康供体血液中
• CTC细胞富集：采用AdnaTest ProstateCanceSelect通过标记有抗EpCam和抗Her2多抗体的免疫磁珠富集CTC
• CTC单细胞分离：利用QIAscout单细胞分离系统对富集后的CTC细胞/磁珠聚合物进行单细胞的分离。2ml细胞培养基加入QIAcout Array后，将富集的细胞/磁珠聚合物加入到Array中。约4小时后，CTC细胞会附着到Array的表面，显微镜下进行CTC分离
• CTC单细胞肿瘤标记物检测：分离后的CTC单细胞，按照AdnaTest ProstateCanceSelect的操作步骤进行细胞裂解，然后对单个细胞多个特定肿瘤标记物进行多重PCR分析
  
  

— 实验结果 —

• 注射入健康供体血液中的20个LnCAP95细胞全部被AdnaTest ProstateCancerSelect富集得到，进而在QIAscout Array中被成功观测。利用QIAscout array可非常容易的根据细胞形态和大小将CTC细胞与白细胞区分开（图1、2）；
  
  

• 在显微镜视野下选择7个感兴趣的CTC单细胞，使用QIAscout的单细胞取样针进行分离后，对每个细胞进行mRNA分析，均检测到actin内参蛋白表达，这表明从QIAscout array上分离下来的CTC单细胞被100%成功地转移到了反应管中（图3）；
  
  

• 检测与前列腺癌相关的标记物的基因表达，结果显示7个分离出的肿瘤细胞中有6个检测出PSMA肿瘤标志物。由于LnCAP95细胞不表达EGFR基因，所以在7个细胞中均没有检测出EGFR转录子。不同肿瘤细胞的异质性结果，可以通过特异性标记物PSA和PSMA的表达结果来区分（图3）；
  
  

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结论

AdnaTest CTC系统配合QIAscout单细胞分离系统可以高效用于CTC富集及后续单个CTC细胞的进一步分离与分析，为液体活检领域提供了一种操作便捷、实用性强并易于推广的CTC单细胞研究策略。

来源: 凯杰生命科学