清洁验证中的方法学验证

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大家好，这是一期从上半年拖到下半年的分享，关于清洁验证的内容已经有多位老师进行过分享，内容都非常精彩、非常系统，今天，我斗胆从一个新的方面展开讨论，“关于清洁验证中检验方法的验证”。

一、什么是清洁验证？为什么清洁验证的检验方法要经过验证？

我们首先回顾一下，为什么要进行清洁？

清洁是为了除去产品残留、工艺残留和环境污染（removesproduct residues, process residues and environmental contaminants ）。

清洁验证是为了证明清洁工艺（清洁SOP）能达到预期的清洁目的。

证明的办法就是检查（检验）产品残留、工艺残留和环境污染带来的影响是否降低到足够低。（并不需要最低）

清洁验证要保证“设备/系统可以安全地生产后续产品（相同或不同产品）”，相当于对清洁工艺的安全性评估。

因此，清洁验证中所使用的检验方法十分重要，需要进行适当的验证。

（举一个不太适当的例子，如果把清洁验证比作是一个产品，那么检验方法就是一把尺，而对检验方法的验证是就对尺的计量。）

二、检验方法的建立

1、清洁验证的检验往往都需要建立专门的检验方法，这是因为：

A、检验的内容是残留物，因此检验的限度值、线性范围，都与产品的检验有很大的区别。

B、如果是外来污染物（如清洁剂），需要开发专门的检验手段。

C、如果活性成分在清洁过程中发生降解，那么原有的方法可能就不再适用。

2、检验方法的建立时需要一些必要的前提

A、首先要确定清洁方法，包括具体的清洁工艺或清洁SOP。

B、要有确定取样方法，因为不同的取样方式会对检测结果造成干扰。

C、最重要的一点，要确定残留物及限度标准，要围绕着残留物的性质和残留限度的大小来选择合适的检验方法。

3、选择检验方法建议应考虑的一些因素

A、分析方法的选择会受到实际情况的限制，选择的出发点是该方法能够满足预期的目的。

B、开发新的分析方法时，应该考虑开发新的方法需要时间、人力、仪器成本。

建议首先选用公司现有的分析方法，或对现有方法的限度值进行调整。比如：药典，公司的内控方法。

C、要考虑到清洁工艺的干扰，如使用清洁剂，要包括对特定成份残留的检测，尤其是当清洁剂的pH值变化较大的，还要考虑到清洁剂对活性成份的影响

。

D、还要考虑取样过程的影响，如使用棉签擦拭时，需要考虑方法的适用性，棉签的干扰，棉签对回收残留物时的回收率。

E、当设备表面取样时的回收率可能低于 100%时，需要进行适当的校正，以保证检验方法的限度要求能够达到。

F、对特定的成份，还要考虑取样至检测的时间间隔，应评估贮存条件（时间、温度、贮存的小瓶等）对样品稳定性的影响。

G、如果活性成份在清洁过程产生降解，还要考虑到对降解产物的分析，或者采用一些非专属性的方法是一个很好的办法。

三、清洁验证中检验方法的特定要求

清洁验证的一个关键点是确定残留限度，这里的残留通常是指“产品残留”（活性成份）的分析方法验证。

通常情况下，清洁验证的方法验证与常用的方法学验证一样，应按照《[url=]中国药典[/url]》附录9101进行，参照“杂质测定”中定量或限度的方法进行验证，包括准确性、精密度、专属性、线性和范围，以及定量限和检测限等内容，需要注意以下方面：

A、准确性和精密度的验证通常只需要在残留限度范围进行，一般为残留物限度的50%-150，综合回收率不低于75%，回收率的RSD应不大于10%。

B、定量限和检测限必须低于样品的可接受限度，而且最好是远低于可接受限度，以确保清洁程序的耐用性。定量限通常达到限度标准的1/10，定量要求低于通常仪器分析的要求。

C、专属性方法应关注可能只有在清洁工艺中使用到的其他物质（例如清洁剂）可能带来的干扰。

对于使用合格/不合格方法来进行清洁验证的公司， 不需进行全面的分析方法验证，只需要报告样品的结果是低于或等于或高于合格/不合格限度值。（适用于限度检查）

通常内毒素检验方法都是药典方法，不需要进行正式的验证，但需要确认其适用性。

经批准的微生物检验方法也不需要额外的方法验证。

四、方法验证与回收率实验

指南中提到“分析方法验证方案可以只包括残留物溶液的验证，也可以包括取样回收率研究，尽管取样回收率研究可以独立于分析方法验证而单独进行”。

但有些同学会用取样回收率实验（一般是用于擦拭法）来代替方法学验证，这是不全面的，这二者还是有区别的。

原因是，清洁验证最关键的是要“防止出现假阴性的情况”，可能是分析方法的灵敏度不够，也可能是取样操作造成干扰， 或者回收率过低，影响因素较多。

从时间顺序上来说，应该是先做方法学验证，确认方法的可靠性后再进行取样回收率实验。

（相对于方法学验证，回收率实验是对取样方法的验证）

二者关注的范围也不同，分析方法的回收率范围一般为定量限至限度标准（或120%），是为了确认检验方法有足够的灵敏度。而回收率的范围一般在限度标准之上，是为了保证取样操作的可靠性，在清洁不彻底时能够有准确的取样量。

同时，二者也有关联，要考虑到取样回收率对分析方法的影响，如果回收率低于100%时，分析方法的限度标准要经过系数的较正，也要考虑检测限/定量限是否能够达到要求。

五、参考文献

1、《药品生产验证指南（2003版）》，化学工业出版社。

2、PDA Technical Report No. 29(Revised 2012)：Points to Consider for CleaningValidation。

3、FDA：GUIDE TO INSPECTIONS VALIDATION OF CLEANING PROCESSES。

4、《制药企业[url=]GMP[/url]管理实用指南》，中国计量出版社。

5、《GMP认证指南》

（资料准备过程中感谢同事王娟、高玲霞的大力帮助）

注：该文在「巍信」首发，微信号: 「WayTrust」

来源：蒲公英