肝细胞肝癌新型肿瘤标记物研究进展

检验之星

易婉婉 ，孙奋勇

同济大学附属第十人民医院 检验科

摘要

肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma ,HCC）是肝癌的最主要类型，在世界最常见肿瘤中排第6位。其死亡率为恶性肿瘤中的第3位。肝细胞肝癌早期诊断困难，加上肝癌的侵袭性行为导至了肝癌患者五年生存率极低。由于多数患者诊断明确时通常为中晚期,而且有效的治疗措施较少,因此发现早期诊断的肿瘤标志物对于肝细胞肝癌的诊断、治疗及预后具有重要的意义。本文将围绕近两年关于肝细胞肝癌分子和生化细胞标记物的研究进展进行总结，以期为指导临床工作及研究提供参考。

关键词：肝细胞肝癌；生物分子标记物；诊断

肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma ,HCC）是肝癌的最主要类型，在世界最常见肿瘤中排第6位。其死亡率为恶性肿瘤中的第3位。约80%的病例与慢乙肝和丙肝病毒感染有关。此外,其具有肿瘤生长快、早期转移等因素,其5年生存率仅为5%。肝细胞肝癌的有效的治疗仍然是一个巨大的挑战。到目前为止,由于缺乏早期敏感、高特异性的诊断标记，其早期诊断较为困难。本文将近两年发表的关于肝细胞肝癌分子和生化细胞标记物的数据进行梳理，以期为临床工作及研究提供参考。

1.1 磷脂酰肌醇-3 (GPC3)

磷脂酰肌醇-3是硫酸乙酰肝素的家族成员之一，是一种蛋白多糖膜蛋白质。GPC3可以在多种类型的肿瘤中发现，包括肺部肿瘤，卵巢癌等。GPC3第一次作为一个有潜力的肝癌肿瘤标志被提出是在1997年。由于其在肝硬化组织中却检测不到，现在其被认为是相对特定的肝癌肿瘤标志物，超过80%的肝癌过度表达GPC3。近年来，GPC3也逐渐成为肝癌治疗目标之一, 关于GPC3的人类单克隆抗体的研究已基本成熟,。GPC3衍生的疫苗开发和测试在晚期肝癌或转移性肝癌患者中正在开展的Ⅰ、Ⅱ期临床试验。在最近的一项研究中纳入了172名肝癌患者，这些患者体内的GPC3水平与AFP成正相关，且GPC3的高表达水平被认为是导至术后无病生存率降低、术后复发的一个独立危险因素。

1.2  抑制因子-1（DKK1）

DICCKOPF-1(DKK1)是WNT/β-catenin 通路的分泌抑制剂，在细胞增殖和生存中发挥控制作用。DKK1经常在多种肿瘤中过表达，依据肿瘤类型不同dkk1可以促进亦可以抑制肿瘤的生长。在肝细胞癌中,DKK1呈高表达。肝癌早期血液中就能检测到DKK1。在肝癌组织标本中，DKK1表达增加与其预后不佳以及无病生存期缩短有关。

1.3 钙调节结合蛋白-A4(S100A4)和钙调节结合蛋白-A14(S100A14)

S100的上调钙结合蛋白A4(S100A4)是钙结合蛋白家族的一员，与广谱的转移性恶性肿瘤有关。在有关肝癌的回顾性研究表明：S100A4表达水平与肿瘤的分化、入侵、复发以及总体生存率存在明显相关性。与分化成熟的肝癌细胞相比，分化差的肝癌细胞中的S100A4呈明显高表达，且肝癌肿瘤细胞的浸润和复发的患者中S100A4的表达水平升高明显。因此，S100A4可作为肝癌肿瘤标志物用来研究肝癌的进展。

S100A14是S100蛋白家族中的一种新型成员。在新鲜的肝癌组织中，无论它是否浸润其他组织，信使核糖核酸与S100A14蛋白水平与多个肿瘤节点和血管浸润有关。研究认为，S100A14在肝癌扩散中有明显作用：肝癌细胞培养和小鼠体内分析实验证实SA100A14的表达水平与肝癌细胞的迁移、侵袭生长行为呈正相关。此外， S100A14表达水平与肝癌病人的总生存期有关。因此，S100A14可成为判断肝癌患者是否存在转移及其预后因素。

1.4 SOX6

SOX蛋白在胚胎发生、调节细胞分化和增殖过程中发挥重要作用，SOX6属于高机动组包含域蛋白质的生物学作用的一组蛋白，主要在红细胞生成方面起作用。在肝癌组织标本中SOX6表达下降，与肝癌的高分化阶段和少于5年的生存期有关。值得注意的是,在新鲜和石蜡嵌入式肝癌组织中SOX6表达呈衰减式，而在相邻的无肿瘤的组织中是没有影响的。因此，SOX6表达减少，现在认为是肝癌预后较差的因素。

1.5亚硫酸盐氧化酶(SUOX)，醛-酮还原酶（AKR1B10）和CD34

近年研究表明，SUOX，AKR1B1和CD34等标志物可单独或联合诊断高度不典型增生结节和分化良好的肝癌。在肝癌的发生过程中，SUOX的水平是降低的，而AKR1B1，CD34的水平是升高的，当与血清AFP联合检测时，SUOX可以独立的预测肿瘤术后复发。

1.6 G蛋白偶联受体激活酶6（GRK6）

G蛋白偶联受体属于细胞表面分子超家族，它调节细胞的增殖分化与生长。G蛋白偶联受体激活酶6（GRK6）是核苷酸结合蛋白的一种，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶亚科。GRK6调节趋化因子的活性受体,参与细胞的调节附着力。GRK6表达水平与侵袭性肿瘤及细胞增殖标记Ki-67成正相关。GRK6表达水平与存活率是负相关的。因此，GRK6被认为是一个潜在的有用的预测肝细胞癌患者预后的标志物。

1.7 G蛋白偶联受体87（GPR87）

G蛋白偶联受体87的作用主要在于调节P53的促活功能，它还在肝癌中过度表达。GPR87能够上调肝癌干细胞CD133的表达水平，并促进其体外生存。值得注意的是,GPR87有利于肿瘤干细胞转移和入侵。被敲除GPR87的小鼠导至肿瘤干细胞的入侵及转移减少。总之,这些数据表明GPR87的表达与肿瘤干细胞之间有着紧密的联系。从而说明GPR87是一个潜在的肝癌肿瘤标志物。

1.8 金属硫蛋白（metallothionein）

金属硫蛋白(MT)是一类细胞内的金属结合蛋白，金属硫蛋白(MT)1和2具有不同的作用，包括维持体内金属平衡和在不同的细胞内致癌的作用。MT-1和MT-2存在于快速生长的细胞核中主要作用在于提供核酸合成过程中所需要的锌酶或是从转录因子中形成螯合物。这两个蛋白的表达增加能够促进肿瘤的生长,导至侵略性,预后不良,以及辐射和耐药性。与其他肿瘤不同，在肝癌组织中，MT-1和MT-2表达减少，这与其预后相关。另外，MT-1和MT-2表达水平高低与肝癌的分化程度以及肿瘤侵犯血管的程度有关。这些数据表明,对肝癌患者来说，下调的MT-1的和MT-2水平可能是预后不良的因素。

1.9 维甲酸诱导蛋白3（RAI3）

维甲酸诱导蛋白3（RAI3）是G蛋白偶联受体的一员（GPCRs）。根据人类癌症类型,其表达可以是下调或上调，它是一个关键的肿瘤抑制基因或致癌基因。在肝癌患者中，RAI3表达的增加伴随着肿瘤的恶性进展和肝切除术后不良预后。因此，它将是用于靶向治疗的肿瘤标志物。

1.10滑膜肉瘤X断点2(SSX2)

滑膜肉瘤X断点2结合蛋白，最初被认为是急性髓系白血病相关的抗原，最近证明它在着丝粒成熟、纺锤体形成过程中发挥最重要作用。在肝癌细胞培养的老鼠中,过度表达的SSX2IP促进肝癌细胞的迁移和侵袭以及增加其耐药性。此外,SSX2IP在肿瘤组织的表达水平与肿瘤大小、肿瘤血栓形成和减少肝细胞癌患者的生存率有关。因此SSX2IP可能代表肝癌进展过程的标志物和一个新的目标治疗方案。

1.11 BCL9

BCL9来源于易位基因t(1;14)(q21;q32)。它在B细胞型急性淋巴细胞白血病中过度表达。BCL9在Wnt/β-catenin信号通路中扮演了重要的角色，它促进了癌症的进展。此外，增加BCL9相关的表达水平五年无病生存率降低,因此制作这种肝癌肿瘤标志物可以预知肝癌患者的预后。

1.12干扰素调节因子-1和干扰素调节因子-2（IRF-1，IRF-2）

IRF-1，IRF-2是转录因子，它具有调节干扰素的作用。这两个转录因子争夺相同的DNA序列,它们彼此的功能相互拮抗。许多证据认为IRF-1和IRF-2在肿瘤的发生和发展过程有重要作用: IRF-1认为是一种肿瘤抑制剂,而IRF-2是致癌基因。在肝癌组织中IRF-1和IRF-2定位在细胞核中。在细胞核中低水平的IRF-1与较差的预后有关，低水平的IRF-2具有较好的预后。因此，IRF-1和        IRF-2的表达水平以及它们的比例可以用来预知肝癌的预后。

1.13 CDK4

CDK4属于细胞周期素依赖丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，它在视网膜母细胞瘤蛋白磷酸化G1-S细胞周期阶段发挥重要作用。CDK4过表达已经在许多肿瘤中发现。在肝癌组织中，mRNA和蛋白质的表达常显示过表达（68%）。值得注意的是，CDK4的表达水平与肿瘤的发展阶段、大小及较差的预后直接相关。

1.14 LASP-1

LIM和SH3蛋白1即LASP-1是一种还没有完全了解其功能的蛋白质。目前已经知道LASP-1参与细胞的运动性。LASP-1的升高与肿瘤的侵袭性有关。体外LASP-1能够促进肝癌细胞的转移。因此,胞质中高水平的LASP-1可提示该肿瘤具有较强的侵袭性。

1.15 PTP4A3

PTP4A3也称为肝脏再生磷酸酶3即PRL-3。它属于PRL的酶家族，它能够调节细胞生存能力。通过微阵列基因表达分析发现PTP4A3 / PRL-3存在于低分化肝癌组织中。另外，PTP4A3的过度表达与患者低生存率有关。PTP4A3 / PRL-3与HCC进展和转移关系密切，表明PTP4A3 / PRL-3是一种不错的肝癌肿瘤标志物。

1.16脂肪酸（fatty acid）

脂质代谢源自于硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)的活性，SCD是一种脂肪酸通量的调节器，它是肝癌的预后的独立因素。SCD表达水平不仅能够预示着肝癌的预后，也与乙型肝炎的感染有关。至于SCD是否有助于肝癌细胞的侵袭还有待进一步验证。一直以来我们认为单不饱脂肪酸（MUPA）源自于SCD酶转化饱和软脂酸(SPA)，降低库夫细胞的激活数量，减少细胞因子的表达，增加肝脏纤维化。增高的MUPA水平有助于促进和维持代谢综合征、炎症的发展，促进肿瘤的生长和进展。

1.17 PAK5

P21激活酶5（PAK5）代表最新的家庭成员PAKS对丝氨酸/苏氨酸激酶活性。30个肝癌组织标本中有25个表达PAK5，这充分的说明PAK5这种基因可以用作肝癌的诊断及提示预后的肿瘤标志物。

1.18 hnRNPL

体液免疫反应肿瘤抗原(抗体),被称为肿瘤相关抗原(TAAs),可以在癌症检测到。异构核糖核酸蛋白L（hnRNPL）是hnRNP复合物的一个组成部分，它参与pre-mRNA的处理。通过免疫蛋白组学筛选乙肝相关肝癌，hnRNPL已经被认为是肝癌相关抗原。hnRNPL自身抗体的效价与肿瘤的大小呈正相关，降低了患者的生存时间。因此,氨基端抗原决定基hnRNPL是一个潜在的肿瘤标志物，至少在乙肝相关的肝癌和肝细胞癌治疗过程中，它是一种有用的肿瘤标志物。

1.19圆柱瘤基因（CYLD）

圆柱瘤基因(CYLD) 是一种肿瘤抑制基因，其编码的蛋白能够将蛋白质中的赖氨酸-63-泛素链打开，水解泛素羧基末端。CYLD在调节细胞的存活、扩散、分化过程具有重要作用。通过免疫组化和组织微阵列分析发现在肝癌中CYLD的信使核糖核酸（mRNA）和蛋白质水平较低。另外，在肝癌细胞中，CYLD抑制NF-KB的活动，却能够恢复被抑制的EGFR-Raf-MEK-ERK信号级联放大系统。因此，CYLD可能是一个有前景的肝癌肿瘤标志物,也可能是肝细胞癌治疗的方法之一。

1.20黑色素瘤相关抗原家族蛋白D-4（MAGED-4）

黑色素瘤相关抗原家族蛋白D-4（MAGED-4），它最初称为MAGE-E1，是一种在恶性肿瘤中高表达的MAGE家族基因。在94例肝癌组织标本中有34例被检出MAGED-4 mRNA过表达。MAGED-4及MAGE D4b蛋白表达水平的高低与肝癌浸润直接相关。此外，MAGED-4与AFP水平结合可以预示肿瘤分化及其血管浸润情况。因此，MAGED-4可以作为早期肿瘤复发的标志及预测生存期的肿瘤标志物。

1.21酪氨酸蛋白激酶受体A3(EphA3)

酪氨酸蛋白激酶受体A3(EphA3) 主要定位于细胞质中和细胞的质膜上。在肝癌细胞中低表达的EphA3提示肿瘤的侵袭力较低。在肝癌组织中过度表达的EphA3与患者总生存期减少相关。

1.22 Flot-1

Flotillin-1(Flot-1)是一种膜蛋白。它作为一种骨架蛋白参与质膜微囊的形成。在多种人类癌症中已经记录到Flot-1水平减低。在肝癌细胞中mRNA与蛋白质水平中发现Flot-1过表达。在肝癌组织样本中，Flot-1水平高低与肿瘤大小、侵袭性、复发及患者生存期相关。

1.23 CD146

CD146是近年来发现的一种具有跨膜结构的黏附分子,属于免疫球蛋白(Ig)超家族成员。CD146最初是从黑色素瘤细胞上发现的肿瘤相关抗原，介导肿瘤细胞间、肿瘤内皮细胞间的同型或异型黏附，促进肿瘤生长、血行转移，是肿瘤进展和转移的标志。Thomann S等[47]研究表明CD146在HCC的侵袭转移机制中有着重要作用，其具体作用机制则有待进一步深入研究。

由于肝细胞癌有效治疗措施不多，其早期诊断显得尤为重要。目前，关于肝癌的肿瘤标志物研究已经成为国内外的热点，但大多数肿瘤标志物特异性及敏感性不高，限制了在临床上大规模的应用。文章中提到的大多数肿瘤标志物，虽然目前还没有统一的标准化检测方法，得出的结果也有待临床确认。但是，随着分子生物学技术、蛋白质组织学技术、生物芯片、PCR 等技术的发展，特异性和灵敏度更高的肿瘤标志物正逐渐被人们发现。所以继续深入研究这些肿瘤标志物，以及积极探讨更有效的肝癌的相关抗原都将是有意义的工作。

参考文献（略）

来源: 医学检验网