今复康陈燃：WFTR—PCR五步走

千姿百态

7月8日，火石创造发起的 “ 精准医疗之肿瘤分子诊断技术与未来趋势沙龙 ” 在杭州顺利举办。陈燃博士总结了当前对肺癌进行诊断的手段、特点，介绍了肿瘤分子诊断的产品、临床研究结果以及未来发展趋势。下面，我们一起来回顾陈燃博士的精彩分享。

公司介绍：浙江今复康生物科技有限公司（简称今复康）成立于2012年7月，由美国斯坦福大学博士后副研究员陈燃博士联合3位志同道合的海归博士创办，位于杭州滨江区天和高科技产业园，是一家定位清晰，发展目标明确的生物高科技企业，致力于研发、生产和销售新型靶向分子技术及癌症系列分子诊断产品。

图注：陈燃 浙江今复康生物董事长

肺癌虽是全球发病率第一的癌症，但也可治疗，如果是在早期发现，最好的治疗办法是手术治疗，再配合化疗，以手术根治为主，它的治愈率才高。所以，早期诊断非常重要，基因检测是分子诊断当中非常重要的一类。我们认为基因检测的主要价值在于，它比CT更早发现癌变，国外研究数据表明，P53的突变，比CT提早一到两年发现癌变。

但分子诊断很复杂，目前主要集中在辅助诊断，肺癌的诊断流程是从检查到辅助诊断到确诊的流程。

肺癌诊断流程• 检查 →辅助诊断 →确诊• 目前分子诊断主要集中在辅助诊断• 早发现早治疗能够大大提高肺癌治愈率• 基因检测有望比CT更早发现癌变

目前最主要的诊断手段

检查实际上现在主要的手段是影象学检查，传统方法是胸片。

因为早期没什么太好的确诊办法，医学上有一个确诊标准就是做组织病理活检。

以上方法最主要的缺陷是确诊周期比较长，所以我们目标是要做到快速诊断——分子诊断。

特别针对CT阳性病人，我们希望让它CT阳性之后配合做分子诊断，直接判断下一步相应的措施，这是辅助诊断的范畴。

为什么做辅助诊断而不做早期诊断？因为在审批过程中，国家CFDA对临床研究有非常确切的样本要求，还需要很长时间的跟踪。

比如，低剂量CT被临床上接受了是因为美国组织了长达十年之久的十万人研究，最后证明确实低剂量CT比传统胸片提高了接近10倍的灵敏度，确实能够帮助一部分病人，才得以推广。对于分子诊断行业来说，做这么大的工作，必须是政府行为。

分子诊断方面，国际上很多研究主要集中在

①端粒酶PCR

② 血液肿瘤标志物自身免疫抗体等

③甲基化检测

④mRNA表达谱

见 下 图

这里再详细地介绍一下端粒酶，首先说一下端粒酶的概念。

端粒酶

• 端粒酶（Telomerase）负责细胞染色体末端端粒DNA的合成，帮助持续分裂的细胞维持染色体的稳定性和细胞寿命。在正常胚胎发育期hTERT基因被关闭→端粒酶阴性。

• 细胞癌变的关键步骤：hTERT基因打开→端粒酶阳性。

• 3名美国科学家 （Elizabeth H. Blackburn,Carol W.Greider和Jack W. Szostak）发现端粒酶和端粒获得2009年度诺贝尔生理学/医学奖。

端粒酶的活性包括它跟肿瘤的特异性、相关性非常高，理论上达到100%。所以国际上基于端粒酶的检测在癌症（比如肺癌分子诊断方面）应用的研究也非常高。

端粒酶检验与肺癌诊断

• 端粒酶活性检测：TRAP，肺癌诊断灵敏度高于镜检

• Sen 2001 Lung Caner 33: 41-9

• 局限：操作步骤繁多，端粒酶容易失活，扩增特异性较差

国际上对于hTERT、控制端粒酶基因的检测也有很多的研究。

hTERT mRNA的检测：肺癌诊断灵敏度高于 TRAP

• Pasrija 2007 Eur J Cancer 43: 1476-82

• TRAP：85.2%

• hTERT：92.9%

• 局限：RT-PCR操作步骤繁多，RNA易降解

我们公司主要在RNA检测的PCR技术方面有独创产品，叫WFTR—PCR，它的主要特色是把传统RTPCR检测RNA操作由15步简化到5步，整个操作过程不超过2.5小时。

产品：端粒酶基因检测试剂盒

检验流程：采集痰液→进行样品处理（30分钟左右）→PCR上机（一个多小时）→数字化的结果（扩增的曲线）→最后电脑软件根据阈值，划一条基线。基线跟普通曲线交界部位的地方就叫Ct值，根据Ct值判断是阳性还是阴性。

我们的产品完成了1105例临床研究：

临床研究的规范性非常重要，首先需要考察研究单位人员和设备是否具备，若具备，之后制订临床实验方案，报各家医院审查，批准之后实施方案。研究结束之后进行数据汇总，请专家统计分析，共同形成临床研究报告，然后审查，归档备查。

后面就是入选标准、确认标准：

最后得出临床研究结果：

结论

• 阳性符合率较好：84.47%，明显高于肺癌痰液细胞学检查的阳性符合率（一般为20%~30%，个别研究能达到80% ）；略高于文献报道肺癌痰液端粒酶活性及传统RT-PCR检测的阳性符合率（67.6%~81.6%）；

• 阴性符合率很好：95.05%，与文献报道痰液端粒酶活性及RT-PCR检测的阴性符合率相当（90%~100%）；

• 肺癌I期检出率达到76.32%，表明该试剂盒具有早期检查的应用潜力。

我们产品目前的状态：今年3月24号在北京通过了国家食药监总局医疗器械技术评审中心组织的专家评审，目前在补充资料的阶段。

陈燃博士谈到了团队对创业的重要性，提出如下两点体会：

① 一定要有团结、并能够资源互补的、优势互补的团队；

② 要做好艰苦、长期奋斗的思想准备。目前，由于生物医药行业是一个需要监管的、有市场准入的行业，所以周期较长，跟监管、审计中心的专家做好沟通非常重要。

嘉宾问答 Q&A

/ Q1 / 就体外诊断试剂有传统的抗原抗体的方法（EGFR和O这些靶向液态活检），你们的市场定位、竞争策略是怎么样的？

陈燃：市场销售确实是目前较薄弱的环节，我们主要精力放在报证上。

关于竞争， EGFR跟我们产品用途差异较大，它主要是针对确诊的肺癌病人，而我们主要针对确诊之前的病人，跟EGFR不存在竞争性。跟传统的抗原抗体存在一定的竞争。但是：

① 因为肿瘤（肺癌）市场容量很大，能够接受各种不同的技术和产品，又因为大家不是完全一样的产品，原理上差别很大，多做几种检测对病人确诊更加有利，所以确诊之前的产品都是有市场的；

②我们技术指标方面很有信心，虽然跟EGFR产品有相似性，它特异性比较好，但它主要用于血液检查的，而我们产品主要用于痰液检查，市场方面还是有区隔的，可以互为补充。

/ Q2 / 早筛比较敏感，对于整体来讲敏感度非常高，你们的产品在体检领域会不会是很大的一个市场？

陈燃：从技术上来说当然可以做，体检确实是非常大的一个市场，但我们产品直接进体检需要一个过程。因为现在体检的取样一般是血液、尿液或粪便，做痰液的体检还没有。所以如果我们要做痰液体检，要单独去宣传推广，运作这一块。

友情提示：嘉宾观点不代表火石创造立场

来源：火石创造