首先说声抱歉,从写上一集“挑选抗体之轻易不说的秘密(第一集)”到现在过去好久了。没办法,Dr. T太忙了。另一方面Dr.T没收广告费,所以写起来没动力。哈哈,开个玩笑,上一集分享了几个相对基本的挑选抗体的技巧:①. 物种越远越好;②. 储存条件-20°C的比4°C的好;③. 储存有BSA的比没有的好;④. 有图的比没图的好;⑤. 多抗比单抗好。(详细内容猛戳这里)这里继续分享更重要的轻易不说的秘密,重头戏在此。
6大公司的比小公司的好。唉~其实主要就是外国品牌的比国产的好,我没有那样说,因为我是中国人。可能不少看官知道,很多外国品牌的抗体其实都是中国厂家生产,然后出去贴个牌又卖回中国而已,不过外国大品牌在质控上面做的确实要好一些。而一些小厂的不是抗体本身不好,而是质控做得不好,所以不同批次性能差别较大。但慢慢的我发现国产品牌越来越重视质控了,还有些国产品牌做的很好,结果被外国大公司给收购了。
7文献越多的越好。好些抗体公司会把引用此抗体的参考文献放在网页上去,哪个引用的多,自然验证过的人多,就会更可靠些。或者自己将货号输入谷歌学术去检索一下,出来的文章越多,就越靠谱,谨慎点的看官还可以点进去看看文献做的应用是不是自己要做的那种。有的公司还在商品页面开了评论/论坛功能,用户可以留言,弄得像某宝、某东一样,挺好的。
8重点在图“微信朋友圈”常常戏谑重点在文字,因为大家都爱看图,确实,图传递信息更快更有效,而且我们还可以从抗体实验展示图中看出一些秘密。第一集第4点说过,有图比没图的好,是指如果抗体说明里展示了相关的实验图片,就比较容易评估这个抗体怎么样。IHC、IF等图比较简单,WB的图就有很多“猫腻”要注意看了。
1)注意看上样样品是否是重组蛋白(即外源过表达的蛋白质,全长或者部分)。外源过表达蛋白质的量常常比内源表达的多很多,可能图上面外源过表达的检测出来条带很清晰、很纯,但是真正检测内源蛋白的时候,这抗体的灵敏度或特异性可能就未必好了。而且Dr.T猜测,多半是内源的检测不到或者效果不好,所以只有放一个外源的检测图上来。下图左边是外源的,右边是内源的,最好挑右边这种哦(虽然右边的条带不好看)!有的图并没写清楚样品是什么,那注意看一下条带大小,与内源的预测大小差很多的可能就是重组蛋白。
2)图一样的,本质上就是同一个抗体。大家有没有碰到过去不同公司网页上找抗体,发现两个公司的抗体的实验展示图是一模一样的,有木有?嘿嘿,其实这就是同一种抗体,不少所谓大公司,只是贴牌商,采购的小公司的抗体贴上自己的牌子。那这时候,哪个快、哪个便宜、选哪个就看你了,你懂的!
OK,暂时就这些啦,以后Dr.T如果发现些秘密,再给大家分享。恭喜看官,你已经get挑选抗体高级技能!
来源:吉凯基因
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