前列腺疾病的免疫组化诊断

病理医师

南京军区福州总医院病理科的余英豪、李慧明在临床与实验病理学杂志2014年12月第30卷第12期发表题为“前列腺疾病的免疫组化诊断”的文章，现艾兰博曼医学网将其内容详情转载以供读者分享，以下为内容详情：

　　前列腺疾病的诊断在很大程度上依赖穿刺标本的病理学检查,而免疫组化染色在其病理辅助诊断中占有重要地位,病理医师对免疫组化的依赖性很高。近年来前列腺肿瘤的生物学标志物不断涌现,如何选择合适标志物、合理应用鸡尾酒抗体(双标、三标)以及应用免疫组化检查解决前列腺疾病诊断中的难题,是日常病理工作经常遇到的问题,本文现对这些问题逐一进行讨论。

1　前列腺免疫组化标志物的选择

　　前列腺疾病诊断中,需选用的免疫组化标志物包括上皮标志物、基底细胞标志物以及在前列腺腺癌中过表达的标志物。

1. 1　前列腺上皮标志物

　　前列腺上皮标志物主要有前列腺特异性抗原(prostate specific antigen, PSA)、前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen, PSMA)、前列腺特异性酸性磷酸酶(prostate specific acid phosphatase, PSAP)和P501s(prostein),这些标志物作用相似,均可表达于前列腺良性和肿瘤性上皮细胞。PSA 虽应用最为广泛,但其在高级别前列腺癌中的反应性不够稳定;PSMA 特异性较高,从良性上皮→高级别上皮内瘤变(prostatic intraepithelial neoplasia,PIN)→高级别前列腺癌,阳性细胞逐渐增加,染色也趋于加深;PSAP 特异性较低,但能维持前列腺癌放疗后的免疫反应性;P501s 是位于高尔基体中的一种跨膜蛋白,对前列腺的特异性很高。免疫组化染色显示特征性的顶端核周颗粒状染色。较适用于高级别前列腺癌,尤其是转移病灶的染色[1,2] 。

　　由于前列腺以外的肿瘤很少表达上述标志物,因此,这些标志物的染色主要是确定肿瘤是否来源于前列腺,如转移性癌的鉴别。但要注意,前列腺的多形性巨细胞癌的巨细胞成分、肉瘤样癌的梭形细胞或肉瘤样细胞、小细胞癌和腺鳞癌的鳞状上皮成分通常不表达上皮性标志物[3,4] 。

1. 2　基底细胞标志物

　　前列腺基底细胞标志物主要有p63和高分子量角蛋白(high molecular weight cytokeratin, HMWCK)34βE12(CK903)及CK5/6。p63 抗体定位于基底细胞核染色,其敏感性和特异性与CK34βE12 相当。CK5/6 是HMWCK5 和HMWCK6 的结合抗体,其在前列腺穿刺活检标本中的整体敏感性、特异性和诊断的有效性类似或略优于CK34βE12。因此,CK5/6 有逐步替代CK34βE12 的趋势。CK34βE12 和CK5/6 为胞质着色,非特异性反应较p63 高。

　　基底细胞标志物的应用在于证明腺体中基底细胞存在或缺失。一般来说,基底细胞缺失是浸润的可靠组织学证据,据此可做出前列腺癌的诊断。但固定不理想的组织也可能导至基底细胞染色出现假阴性。此外,一些良性病变以及部分高级别PIN 也可出现基底细胞层的中断。p63 胞质着色应视为阴性,合适的p63 抗体滴度可将胞质着色减少到最小。在判读免疫组化染色结果时,需仔细观察细胞内免疫阳性信号的定位。

1. 3　前列腺腺癌细胞阳性表达的标志物

　　目前认为对前列腺腺癌相对特异的标志物有α 甲基酰基辅酶A 消旋酶(α-methylacyl CoA racemase, AMACR)(P504s)和成红细胞病毒E26 致癌物(erythroblastosis virus E26 oncogen, ERG)蛋白。P504s 是首个完整记载前列腺癌细胞的阳性标志物,标记前列腺癌的敏感性为80% ~100%,特异性为79% ~100% [5] ,P504s 阳性也可见于结节性增生、萎缩腺体、不典型腺瘤样增生( atypical adenomatous hyperplasia, AAH) 和高级别PIN[6,7] 。P504s 不属于器官特异性标志物,在前列腺外恶性肿瘤,如尿路上皮癌中亦可表达,特别是在肾源性腺瘤(nephrogenic adenoma)中呈强阳性,可能被误诊为前列腺腺癌[8]。

　　前列腺腺癌TMPRSS2-ERG 基因融合是其特异性表现,免疫组化检测前列腺腺癌中ERG 蛋白表达与FISH 检测ERG 基因重排具有相关性[9,10] 。Falzarano 等[11] 对271 例前列腺癌和112 例前列腺非肿瘤病变标本进行ERG 蛋白及FISH-ERG 基因重排检测,发现ERG 蛋白定位于细胞核,前列腺癌的阳性率为37%,通过免疫组化法检测ERG 蛋白预测ERG 基因重排的敏感性和特异性分别为96% 和99%。112 例前列腺非肿瘤性病变标本的免疫组化和FISH 检测均未发现ERG 蛋白和ERG 基因重排。

2　免疫组化多重标记染色及其应用

　　免疫组化多重标记染色在前列腺病变病理诊断中扮演着重要角色。多重标记包括双标(2 种标志物混合染色)及三标(3 种标志物混合染色)。双标染色可为基底细胞双标染色或上皮细胞和基底细胞标志物双标染色,如基底细胞双标染色采用p63 和CK34βE12 或CK5/6 联合染色,通过突出基底细胞胞核和胞质/ 胞膜的着色提供更强的阳性,降低良性腺体内和腺体之间的染色可变性,使基底细胞层以线性和连续的方式标记出来。上皮细胞和基底细胞标志物双标染色采用P504s 和基底细胞标志物p63 双标染色。这种双标染色显示癌性上皮P504s 呈胞质着色,而基底细胞p63 呈胞核着色。双标染色通常通过使用单色(单酶)检测将它们加以区别[12] 。

　　三标染色通常由P504s + CK34βE12 + p63 标志物组合而成。三标染色通常需要采用2 种色原,故又称为双染三标染色。目前已有商用的双染三标前列腺病变检测试剂盒。采用组合式抗体(P504s + CK34βE12 + p63)和非生物素型双酶标记法,即辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),通过特定的标签技术让HRP 酶只识别混合抗体中的p63 和CK34βE12,而AP 酶只识别P504s。AEC 显色剂显示HRP酶识别抗体p63 和CK34βE12,显示为红色;BCIP/ NBT 显示AP 酶识别抗体P504s,显示为黑色。这种双染三标染色的优势非常明显,对基底细胞的敏感性更高,可在同一张切片中对3 种标志物进行观察,使得对疑难病变的观察更加直观(图1 ~10)。不同前列腺病变的三标观察结果总结于表1。




3　免疫组化在前列腺疑难病变诊断中的应用

　　前列腺穿刺活检中经常会遇到疑难病变,除了组织学特征需加以确定外,通常需要选用一组抗体进行免疫组化染色判断,特别是非典型病变的鉴别诊断。笔者在这里特别推荐双染三标抗体标记,其能够解决大多数诊断难题。如果未采用双染技术,通常不主张仅使用1 种抗体染色以避免假阴性或假阳性结果,而选择一组合适的具有互补作用的抗体。

3. 1　非典型小腺泡增生( atypical small acinar proliferation,ASAP)

　　其是个描述性术语,用于活检标本的病理报告,指在活检标本中含有疑似腺癌的非典型小腺体,但细胞学或结构的非典型性又不足以明确诊断为癌病变。ASAP 主要与小灶性前列腺癌鉴别,这是免疫组化在前列腺病理中最常见和最重要的应用。穿刺活检标本中小灶性前列腺腺癌可以借助免疫组化染色,如结合P504s 阳性、基底细胞层缺失和组织学特征确立诊断。如在活检标本中非典型腺体<4个,同时伴有炎症或结构/ 免疫组化上模棱两可不足以做出癌明确诊断时,采用ASAP 是一种有效的辅助诊断。事实上,ASAP 是再次活检中合并癌或后来诊断为癌的重要预测因子。因此,病理医师需告之临床医师应对患者积极随访并适时再次活检。

　　当非典型小腺体伴有高级别PIN 时,应首先考虑到高级别PIN 伴有相邻的非典型小腺体(high-grade prostatic intraepithelialneoplasia with adjacent small atypical glands, PINATYP)的诊断。PINATYP 是一个术语,用来描述与高级别PIN紧密排列在一起的ASAP。免疫组化显示非典型腺体周围存在斑驳样~ 灶性基底细胞层标记。与单纯高级别PIN 相比,PINATYP 在重复活检中癌的检出率更高。

　　由此可见,无论是ASAP,还是PIN ATYP 均是日常病理诊断经常遇到的疑难病例,组织学与免疫组化相结合对诊断至关重要。

3. 2　非典型大腺泡增生

　　在穿刺活检中见到无明显浸润的非典型大腺体时,诊断上主要考虑为高级别PIN、筛状型导管腺癌、导管腺癌和导管内癌。筛状型导管腺癌是由大的“背靠背”的腺体构成,腺体内有桥状结构,使腺腔呈裂隙状。导管腺癌有两种类型,一种为大量乳头状生长模式,结构类似于子宫内膜样癌;另一种为导管内癌,其特征为导管内乳头状生长伴复杂的腺体结构,实性,粉刺样坏死。

　　采用免疫组化进行鉴别诊断,上述病变中P504s 经常呈阳性反应,因此要重点观察基底细胞标志物的分布。如果基底细胞仍完全或部分保留,那么基本上可以排除浸润性癌。这样范围就可以缩小到高级别PIN 和导管内癌。高级别PIN 和导管内癌主要依靠组织学进行鉴别。导管内癌在细胞学和结构改变程度上均超过高级别PIN,通常合并浸润性癌[13] 。如果基底细胞缺失,则考虑筛状型导管腺癌和导管腺癌。这两种病变主要通过上述组织形态学进行区分。

3. 3　萎缩性腺体与前列腺腺癌

　　在前列腺穿刺活检中,萎缩性病变,尤其是部分萎缩和萎缩后增生可能被误诊为腺癌。特别是萎缩后增生可出现增殖活性增高及上皮细胞核仁明显等改变,这是诊断中的常见陷阱,因此必须熟悉它们的组织学特征,免疫组化染色对于诊断困难的病例很有价值。与前列腺腺癌不同,前列腺萎缩性病变包括部分萎缩ERG 染色均呈阴性[9 -11] 。关于萎缩性病变与萎缩型前列腺癌的形态学及其免疫组化特点参见表2、3[5] 。




3. 4　其他病变

　　还有一些病变需与前列腺癌进行鉴别。这些病变不常见,但非常重要。包括:(1)前列腺尿道部的肾源性腺瘤,酷似前列腺癌,特别是肾源性腺瘤中PSAP 也可呈局灶阳性,但肾源性腺瘤PAX2、PAX8 染色阳性可与前列腺癌鉴别[14] 。(2)低分化尿路上皮癌与高级别前列腺腺癌:PSA在前列腺癌中呈阳性,尿路上皮癌中呈阴性。前列腺癌中CK34βE12 和p63 均呈阴性,尿路上皮癌中呈阳性。此外,CK7、CK20 呈弥漫阳性,对于尿路上皮癌均具有特异性,有助于排除前列腺癌。(3)继发性结直肠腺癌与前列腺腺癌:前列腺导管腺癌和腺泡腺癌PSA、PSAP 和prostein 染色均阳性,而结肠腺癌中这些指标均阴性,但CK20、CDX-2、villin 和β-catenin 染色阳性。(4)副神经节瘤与高级别前列腺腺癌:副神经节神经内分泌标志物阳性,且支持细胞S-100 蛋白阳性,而前列腺分化标志物PSPA 和PSA 阴性。


参考文献略


来源：临床与实验病理学杂志  作者：余英豪、李慧明