生物素-亲合素系统

青草

上次给大家介绍了Strep Tag表达和纯化系统，发现很多朋友对生物和亲和素的应用比较感兴趣，本周为大家简单介绍下生物素－亲合素系统。

生物素－亲合素系统（Biotin-Avidin—System，BAS）是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世，BAS很快被广泛应用于医学各领域。近年大量研究证实，生物素—亲合素系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应，使BAS免疫标记和有关示踪分析更加灵敏。它已成为目前广泛用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究的新技术。

生物素（biotin）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244.31Da．生物素分子有两个环状结构（如图），其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部位；II环为噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的惟一结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联，包括蛋白质，核酸，多糖，脂类等。

亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pI=10.5；耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。生物素与亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用，亲和常数（K）为1015 M-1，比抗原与抗体间的亲和力（K=105-11M-1）至少高1万倍。并且，二者的结合稳定性好专一性强，不受试剂浓度，pH环境，抑或蛋白变性剂等有机溶剂影响。由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，这一特点可以用于构建一个多层次信号放大系统。因此，BAS即可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于上述各类反应体系中反应物的分离、纯化。

亲和素由于带有一个糖链侧链，导至容易和细胞表面的多糖发生非特异性亲和。并且亲和素等电点高达10.5，这一般缓冲体系中带正电荷，容易与带负电荷的蛋白质发生离子作用。因此，链霉亲和素被发现能避免这些缺点，具有更广发的应用。

链霉亲和素三维结构

链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素，并且不带任何糖基，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015 M-1。链霉亲和素的适用范围比亲和素更为广泛。

本公司已开发出多种链霉亲和素供大家选择，如含半胱氨酸的重组核心链霉亲和素（r-cSA），游离的巯基在一般反应中比氨基活泼，可以优先参与多种基团反应，常用于定向键合。不含半胱氨酸的重组核心链霉亲和素（r-cSA2），与天然链霉亲和素相比，保留核心区域，不含多余序列，活性和特异性更高，可做常规的应用。带组氨酸标签的重组链霉亲和素（r-SA），用镍柱能轻易从混合液中回收链霉亲和素、或标记的抗原抗体等。

本周就介绍到这里，由于BAS系统研究较为广泛，并已有大量应用，下次将继续为大家介绍BAS的应用。

chenwei

biotin 与 avidin 以及biotin 与SAV 是很好的系统

尤其是用在当前信号增敏的迫切需求体系中 具有很好的应用价值