实时荧光定量PCR技术110问-黄超杰版

huangchj03

      

1、  实时荧光定量PCR的英文全称是什么？

      

2、  实时荧光定量PCR技术包括那些类型？

      

3、  探针法-实时荧光定量PCR技术主要包括哪些类型探针？

      

4、  不同类型的实时荧光定量PCR方法分别是由哪些人或公司发明？

      

5、  实时荧光定量PCR的基本原理？

      

6、  自身淬灭探针定量（Self-quenched Probe）PCR的原理？

      

7、  什么是基线、荧光阀值、循环阀值？

      

8、  染料法-实时荧光定量PCR都包括那些染料？

      

9、  SYBR Green I等染料的定量原理？

      

10、            SYBR Green I染料法溶解曲线步骤中，平行样本出现细微的Tm值上的差异是否正常？为什么？

      

11、            列举探针法-实时荧光定量PCR技术常用到的荧光基团和淬灭基团组合？

      

12、            什么是荧光共振能量转移（FRET）？

      

13、            TaqMan探针、分子信标等探针法定量原理？

      

14、            探针法的探针上荧光基团与淬灭基团标记位置？能否进行位置调换？

      

15、            TaqMan探针上的淬灭基团能否标记在探针中间位置或更靠近荧光集团的位置？如果可以的话，注意事项是什么？

      

16、            为什么探针设计是要求碱基G（鸟嘌呤）的数量少于碱基C（胞嘧啶）的数量？

      

17、            为什么荧光基团不能标记到碱基G（鸟嘌呤）上？

      

18、            在做标准曲线试验中，影响扩增效率的因素包括哪些？

      

19、            怎么解决染料法实时荧光定量PCR的引物二聚体现象？

      

20、            染料法-实时荧光定量PCR有哪些优缺点？

      

21、            探针法-实时荧光定量PCR有哪些优缺点？

      

22、            市场上常见的实时荧光定量PCR仪品牌和型号？

      

23、            哪些实时荧光定量PCR仪可以进行HRM分析？

      

24、            影响实时荧光定量PCR仪检测灵敏度（设备检测限）的主要因素有哪些？

      

25、            一般实时荧光定量PCR仪定检周期是多少？

      

26、            常见的实时荧光定量PCR仪设备检测灵敏度分别为多少？

      

27、            常见的实时荧光定量PCR仪常见检测反应体积范围？

      

28、            ABI stepone plus设备说明书中建议的扩增体积为10-30ul，软件设置选项提供范围为5-50ul，那么该设备适应的扩增体积为多少？

      

29、            分子信标为什么不被Taq DNA聚合酶水解？

      

30、            染料法实时荧光定量PCR能否做多重PCR实验？怎么做？

      

31、            探针法实时荧光定量PCR能否做多重PCR实验？怎么做？

      

32、            ROX染料是什么，有什么作用？

      

33、            ROX I与ROX II有什么区别？

      

34、            TaqMan探针在反应体系中能否与下游引物组合引发扩增影响检测结果？

      

35、            引物二聚体现象是否影响探针法实时荧光定量PCR的反应？如果没有影响，说出理由，如果有影响，给出分析。

      

36、            国内市面上主流的引物和探针合成厂家有哪些？

      

37、            国内商场是常见的分子检测试剂盒生产厂家有哪些？

      

38、            引物和探针常用的储存浓度为多少？

      

39、            引物和探针常用的工作液浓度为多少？

      

40、            Q-PCR反应液中添加的稳定剂和增强剂有哪些？

      

41、            实时荧光定量PCR对DNA聚合酶的要求有哪些？

      

42、            谈一谈你了解的市面上Taq DNA聚合酶品牌？

      

43、            Taq DNA聚合酶有哪几种方式实现热启动？

      

44、            不同热启动方式的Taq DNA聚合酶的优缺点？

      

45、            怎样设计实验验证 DNA聚合酶的性能？

      

46、            在实时荧光定量PCR实验前后需要做哪些防污染措施？

      

47、            紫外照射杀菌以及破坏核酸的原理？

      

48、            试剂盒中加入的抗污染体系是什么以及其工作原理？

      

49、            怎么测量的DNA或RNA的浓度、纯度、完整性？

      

50、            分子检测和研发实验室在白大褂有哪些要求？结合实验进行分析。

      

51、            提高试剂盒检测灵敏度常采用的方法和手段有哪些？

      

52、            TaqMan探针与分子信标在应用上策略的不同点？

      

53、            TaqMan探针与染料法在应用上策略的不同点？

      

54、            染料法引物设计的原理与注意事项？

      

55、            TaqMan探针引物/探针设计的原理与注意事项？

      

56、            TaqMan探针法实验中，如果阴性对照出现了扩增，常见的原因有哪些？

      

57、            TaqMan探针法实验中，如果阴性对照出现了扩增，怎么设计实验找出原因？

      

58、            TaqMan探针法中，上游引物与探针在位置上能否出现重叠？为什么？

      

59、            透明八连管与乳白色八连管之间的差异有哪些？

      

60、            能否在八连管管壁或顶部上标记信息？

      

61、            染料法和探针法对目标扩增片段范围的要求是多少？

      

62、            扩增体系大小对反应Ct值是否有影响？

      

63、            常有的核酸提取方法有哪些？

      

64、            不同的核酸提取方法的优缺点？

      

65、            基于荧光定量PCR方法设计的检测试剂盒需要做哪些性能验证试验？

      

66、            核酸检测试剂盒精密度实验的操作步骤？

      

67、            核酸定量检测试剂盒检测限项目的要求是什么？

      

68、            阳性对照质粒是否需要进行线性化处理？说明理论基础。

      

69、            影响核酸检测试剂盒（荧光-PCR法）检测灵敏度的因素都有哪些？

      

70、            如果在试剂盒研发过程中因操作不当导至出现了气溶胶污染，作为研发人员如何找出问题出现在哪个环节，并怎样解决该问题？

      

71、            如果扩增出现异常，比如出现了阴性样本出现了扩增信号、样本之间的Tm值出现了大的偏差等，接下来的实验步骤？

      

72、            操作实时荧光定量PCR实验所需要的实验室布局要求有硬性指标哪些？

      

73、            样本制备间采用超净工作台能否满足需求？

      

74、            什么是微生物限度间和阳性对照间？

      

75、            对于实时荧光定量PCR实验中采用的水有哪些要求？

      

76、            蒸馏水、无菌水、去离子水有什么区别？

      

77、            实验室常用到的冰箱温度范围是多少？

      

78、            新到实验室的样本需要哪些操作实验？

      

79、            常见的实时荧光定量PCR实验的实验记录都包括哪些项目？

      

80、            实验记录能否在做完实验几天后统一补写？为什么？

      

81、            浓度为1copies/ul的均匀样本，吸取1ul，采用检测限为1000copies/ml的试剂盒检测进行三个平行检测，三个平行都为阳性的概率为多少？

      

82、            移液器的使用规范包括哪些？

      

83、            TaqMan探针的长度对荧光信号强度以及荧光背景是否有影响？说出理论依据。

      

84、            减少引物二聚体的方法有哪些？

      

85、            信号的最佳采集温度是在哪一步？

      

86、            什么是国际单位IU？举例说明核酸检测试剂盒中常用的IU的定义。

      

87、            引物设计常用到的操作软件有哪些？

      

88、            寻找设计试剂盒的靶基因有哪些途径？

      

89、            如何验证试剂盒的特异性？

      

90、            什么是产品的设计输入和产品的设计输出？

      

91、            什么是简并引物？

      

92、            常见的简并引物策略有哪些？

      

93、            谈谈LNA技术在实时荧光定量PCR中的应用？

      

94、            目前国际大牌罗氏等的HBV、HIV等核酸检测试剂盒的检测限几乎都能做到15IU/ml，按1IU=5.6copies计算，几乎为84copies/ml，在50ul反应体系的情况下，你觉得他们是怎么实现的？

      

95、            TaqMan探针能区分SNP吗？

      

96、            检测基因突变或SNP常采用的方法包括哪些？

      

97、            什么是内标？内标的意义是什么？

      

98、            从成本角度思考，染料法与探针法的优缺点？

      

99、            总结常规PCR、多重PCR、染料法荧光定量PCR、TaqMan探针法荧光定量PCR、LAMP等恒温扩增法、胶体金试纸条法等各自优缺点？

      

100、        什么是数字 PCR？

      

101、        谈谈数字PCR在临床上的应用前景？

      

102、        试剂盒稳定性试验都包括哪些实验？

      

103、        核酸检测试剂盒的生产车间与质检实验室在布局上有哪些要求？

      

104、        核酸检测试剂盒的临床试验检测的病例要求？

      

105、        核酸检测试剂盒的临床试验最常采用到的统计学指标有哪些？

      

106、        核酸检测试剂盒对引物和探针的纯化一般采用那种级别？

      

107、        什么是精密度、准确度和精确度？

      

108、        什么是溯源？

      

109、        影响荧光定量PCR技术推广或普及的主要因素有哪些？

      

110、        二代测序技术、恒温扩增技术、芯片技术等一些新兴的技术对荧光定量PCR技术等冲击分析？

   
百度云附件：实时荧光定量PCR技术110问-黄超杰版.doc   

huangchj03

年前总结了一些关于Q-PCR的常见问题，没有标准答案，希望有兴趣的人在这个帖子里完善相关问题，并一起学习相关知识。

同花顺

楼主如果能以自问自答先编辑一个初稿出来是不是更好。可以作为科普材料了。

huangchj03

同花顺 发表于 2015-2-28 23:27
楼主如果能以自问自答先编辑一个初稿出来是不是更好。可以作为科普材料了。

有时候多想听听大家的答案，虽然我也会自问自答

ggyzy99

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能发到百度云吗？谢谢

黄先生

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