量值溯源和量值等当

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检验界一直在追求一个理想的梦，一个病人样品走遍世界，在任何一个临床实验室对样品检测结果相互具有可比性。溯源性也正是为此提出的，为解决临床实验室检测结果的溯源性，将会制备出越来越多的（有证）参考物质。本文介绍了已发布的JCTLM,ERM-DA471，CRM470等参考物质在免疫标准化的作用，以及ERM-DA470如何取代CRM-470.更重要的引入了不同检测系统之间量值等当的概念。

    ISO 17511发表于2003年8月15日，时间过去了8年。很多专家非常乐观，认为： …将会制备出越来越多的（有证）参考物质…，解决临床实验室检测结果的溯源性。但是，认真回顾这8年内，国际上有多少新的参考物质或参考方法被批准认可了？新发布的ERM-DA470参考物质，替代原先的CRM 470。似乎至今都对发布的ERM-DA470k都众口称赞，认为是实现溯源性又一个范例。可是，却没有去深入研究，由此又引出了什么值得我们令人深思的问题？
以下，我对近期来与蛋白关联的标准化问题作介绍。
一、JCTLM确定了特定蛋白免疫参考方法
        在免疫检测参考系列上，经常在争论：哪个检测方法是最好的？很长时间内，临床实验室总是被误解认为：免疫散射比浊最好、而且它就是特定蛋白检测的参考方法。其实在上世纪的1990年代中，从建立CRM 470参考物质起，国际上早就将免疫单向扩散、免疫散射比浊、和免疫透射比浊三个技术，一起用于为CRM 470内的14种蛋白进行值的设定。
以后，国际上在建立载脂蛋白A和B的标准化物质中，依然采用了这三个免疫方法为这两个分析物的参考制品定值。实践反复说明了：这三个方法在检测分析性能上具有的水平等当。
        2008年6月13日，国际检验医学溯源性联合委员会（JCTLM），已经发布公告，宣布粒子增强的免疫透射比浊、和粒子增强的免疫散射比浊均为JCTLM认可的参考程序。2010年在介绍胱蛋白酶抑制剂C的标准化参考物质ERM-DA471文章中，专门提到了：使用了几个免疫检测程序进行了特性检测（不同的分析原理为：颗粒增强免疫透射比浊、颗粒增强免疫散射比浊、和酶放大的单向免疫扩散）和多个不同的抗胱蛋白酶抑制剂C抗体进行检测。
        这些程序的原理近期已经被检验医学溯源性联合委员会（JCTLM）列为参考方法。
        因此，我们不要再为免疫透射比浊和免疫散射比浊这两个技术去争论高低了。它们都必须是使用粒子增强后，才被认可为检测蛋白的参考程序。

二、认识ERM-DA471：胱蛋白酶抑制剂C的标准化
        1、首先要解释的是，原先欧洲标准参考物质均以CRM命名，这个CRM（Certified Reference Material）是有证的参考物质之意，没有特出是欧洲的参考物质。现在改为ERM（European
Reference Material）正式表明是欧洲的参考物质。DA之意是欧共体的参考物质和参考测量研究院（IRMM）在分类各种参考物质时指出该物质性质的分类性质代码。D：在组成中被证实的与健康关联的基质物质；A：D类中为人的体液（人体体液：血清、尿液等）。后面的471只是各个参考物质的序号而已。
        2、ERM-DA471：2010年5月，欧盟联合研究中心委员会（European Commission Joint Reaserch Center，JRC）发布了胱蛋白酶抑制剂C（Cys C）的参考物质ERM-DA471。该参考物质的证书说证实了该参考物质内CysC含量为5.48 mg/L，不确定度为0.15 mg/L。并说明：1）在复溶物质中Cys C，由粒子增强的免疫散射比浊、粒子增强的免疫透射比浊、和单向免疫扩散三个检测方法进行检测。2）该定值由4个实验室各自检测，由7个可接受均值的未加权均值确定。证实的质量浓度，通过Cys C的纯蛋白制品可溯源至SI单位。3）扩展因子k=2的综合不确定度U，相当于95%的可信水平。这是按照GUM，ISO，1995导则估计的。特别须注意的是，该参考物质在出售后一年有效（此点与原CRM470宣布的有效期可长达10年绝然不同）；注明了最小用量为2 ?l。

    三、 CRM 470 的推出对全球多个蛋白检测质量的影响。
        1989年国际临床化学和检验医学协会（IFCC）成立血浆蛋白委员会和IFCC科学部一起，研究和实施对人血清蛋白的含有基质的参考物质的处理、确认、和定值。1993年，共同体的参考局发布了CRM 470（以后被重新评价和命名为ERM-DA470），被确认为14种蛋白的参考物质。
由于CRM 470已经为多个特定蛋白的标准化服务了近20年。确实使这些项目的检测结果在全世界范围内的可比性有了实在的进步。

        图1 欧洲室间质量评估（DGKL EQAS）结果，显示了各个公司使用CRM 470为他们产品的参考物质前后（1993年和2002年）质量调查结果有了明显的改善。图上部分为免疫球蛋白M（IgM），下部分为转铁蛋白（Tf）。

    图1经常被来自欧洲的学者展示，说明CRM470确实为改善14种特定蛋白的检验质量起了重要作用。

       来源：元升生物微信