每日一技术-HRM技术

huangchj03 · 发表于 2015-1-31 15:42

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本帖最后由 huangchj03 于 2015-1-31 15:53 编辑

高分辨率溶解曲线(High一resolutio Melting Analysis)是一种全新的DNA扩增后分析技术,是2003年由美国的犹他大学(University of Utah,usA)的科学家和Idallo科技公司(IdahoTechnolog,USA)联合开发的。高分辨溶解曲线分析技术(High-Resolution Melting analysis)是利用一种特殊的双链DNA突光饱和染料,实时监测升温过程中双链DNA突光染料与PCR产物的结合情况(反映为突光信号的变化)。传统的非饱和荧光染料(如SYBR Green I等)对PCR反应存在抑制作用,故在实验体系中使用的浓度很低,远远低于体系中DNA双链结构中的结合饱和的程度,DNA双链上仍存在未结合突光染料的空置位点。温度升高,DNA双链发生变性,解链部分的不饱和突光染料分子发生迁移,染料分子重新结合到未解链的双链部分的染料空置位点,造成突光信号失真,无法反应DNA双链解链情况,。而这种特殊的双链DNA饱和焚光染料(如LC Green等)与DNA双链结合能力更强,对PCR反应抑制作用很低,结合DNA双链无未结合突光染料的空置位点。DNA双链高温变性时,解链部分的饱和突光染料离开DNA单链,不发生分子迁移,突光强度变化具有更高的分辨率,。通过实时监测升温过程中DNA饱和突光染料与体系中的DNA双链的结合情况,实现DNA双链的溶解变性分析。分析溶解曲线变化反映核酸性质、碱基组成差异,达到基因分型,重复序列分析,突变扫描、甲基化检测等目的。