韩健教授关于DPO引物技术的看法-另一种多重扩增技术

huangchj03

去参加AACC会，看到一个韩国公司（SeeGene)开发出了一系列多重PCR感染性疾病诊断的产品。几乎和Genaco一样，有HPV分型，呼吸道感染，血源感染，肺结核耐药等产品。绝大多数产品还没有临床验证方面的论文。不过从产品开发的速度上看好像是很有希望的技术。去年初一个搞投资的朋友让我看过他们在核酸研究上发表的论文（Chun et al, Nucleoic Acids Research, 2007, Vol.35, N6.).



这个叫DPO (dual priming oligonucleotide)的新技术原理是在长核酸引物的中间加几个Inosine连接。这样引物的五撇端和三撇端就变得相对独立了。他们的假说是：“多重PCR难做的原因是因为非特异性引物错误地启动核酸合成”。因此用DPO可以减少非特异性合成，因此就能增加多重扩增的特异性。

这个假说和我做tem-PCR时的假说不同。我的假说是：“多重PCR难做的原因是引物之间因为和多聚酶的亲和力不同因此不兼容。”所以我着手解决的是引物不兼容的问题，而他们着手解决的是false priming 和primer dimmer的问题。

从论文中列出的反应条件看，他们在敏感性上还有很大的问题。他们一共要扩增45个周期，每个周期annealiing and amplification 都需要九十秒。一次整个反应大概需要四个小时。

他们产业化的另一个错误是检测平台的选择：他们选择了电泳，用分辨扩增产物分子大小的方法做诊断。

我认为，DPO之所以工作，是因为分段引物和tem-PCR 的巢式引物有异曲同工之妙，都是增强了引物之间的兼容性。但是DPO扩增效率远不如tem-PCR的超级引物，因此tem-PCR（及以后开发的arm-PCR)的敏感性相对要好些。

无论如何，DPO是一个很好的技术。如何产业化，和什么检测平台接轨，才是衡量这个技术能否成功的关键。