PCR基础原理——“织围巾”

007 · 发表于 2015-1-28 06:30

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导读：PCR 简单来说就是在合适条件下，热变性-复性-延伸过程的不断重复。整个过程有点像是织围巾，但也不完全是这样。织围巾（PCR）所必须的原材料有这样几个元素织样（模板）、起针（引物对）、毛线（dNTP）和针（Taq酶以及缓冲体系）。

　　首先要将织样拆解开（通过95℃高温，将DNA双链拉链状解链），然后将实现织好的起针配合在织样上（通过退火将合成的引物结合在单链的模板上），按照织样（模板），沿着起针（引物）用毛衣针（Taq酶）将毛线（dNTP）一针针连接上去（72℃下延伸扩增）。

　　通过对所有织样（包括原先的模板及新形成的模板）的拆解（解链）及新的起针（引物）搭配（结合）、编织（Taq酶扩增）这样循环n次后，围巾的数量就以2的n次方（产物量就以2的n次方）增多了。

　　PCR试验最早是以Klenow片段进行扩增的，由于这种酶高温会变性，所以最早的PCR实验员是很苦逼的，每个循环都需要开盖、加酶、换水浴锅，这样35个循环……后来发现了Taq酶之后，事情就简单了，由于Taq酶可以应付高温环境，于是就产生了新的PCR仪，也就是现在的定时变温金属浴。还有别忘了加热盖，没有热盖的话，管内高温会导至液体全都蒸发到管盖上，就没法扩增了。

　　PCR的技巧，关键的PCR技巧在于引物的设计，这个我们以后还可以深入解释。但有的时候，如果要克隆固定片段，引物设计位置是定死的，只能微调，那什么引物设计软件都是白搭。

　　其次的关键是镁离子浓度，镁离子是Taq酶的激活剂，浓度过低会导至PCR产量下降，浓度过高则会产生非特异性扩增。

来源：检验地带网