生化实验室15大常识

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1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇?

　　保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。

　　2.如何将不同构型的质粒DNA区别开?

　　由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同，cccDNA的泳动速度最快，通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。

　　3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么?

　　异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

　　4.用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子?

　　用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

　　5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍，有什么作用?

　　RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏，使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活，使释放出的RNA不被降解。

　　6.蛋白印迹中封闭液的作用?

　　封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位，以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。

　　7.DNA通常保存在什么缓冲液中?

　　采用TE缓冲液，Tris-HCl的缓冲系统，加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性，对DNA起到保护作用。

　　8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA?

　　通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。

　　9.简单的克隆载体必需包括什么?

　　复制起点;选择标记：主要是抗性基因;多克隆位点：便于外源DNA的插入。

　　10.用酚抽提细胞DNA时，有什么作用?

　　使蛋白质变性。

　　11.在分离DNA时，要使用EDTA，为什么?

　　EDTA是金属离子螯合剂，螯合二价离子，抑制核酸酶的活性。

　　12.在分离DNA过程中，造成DNA分子断裂的因素有哪些?

　　核酸酶降解;化学降解;物理剪切。

　　13.使用离心机应注意什么?

　　首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守，发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。

　　14.分子生物学实验室常用的灭菌方法有哪些?

　　高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌。

　　15.使用移液器有哪些注意事项?

　　垂直吸液、慢吸慢放;选择合适的量程范围，不能超过量程使用;选择与移液器匹配的枪头，安装枪头时不要用力太猛;移液器每日用完后，应旋到最大刻度。