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[分享] 化学发光方法学浅析

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发表于 2015-1-17 00:45:14 | 显示全部楼层 |阅读模式

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化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射,通过吸收化学能(主要为氧化还原反应),从基态激发至激发态。退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上),释放能量产生光子,以光形式放出能量从而导至的发光现象。其主要特点为消耗发光剂。同时量子效率相对较低。
1.1 按化学反应类型分类:可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗,而反应体系中发光剂充分过最,因此发光信号强而稳定,且发光时间较长。因此可采用速率法测量,故检测方式简单、成本较低。酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移,而且低端斜率容易呈非线性下移。而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗,同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈,即含量总是相对不足,因此发光信号持续时间较短;如果直接在免疫反应杯中启动发光反应,由于发光剂被很快消耗,故只能进行一次性测量。所以重复性较差。为降低检测成本并实现重复测量,目前普遍采用原位进样加流动池的时间积分测量方式。因此仪器成本及维护费用较高,而且反复使用的流动池可能导至交叉污染;并目冲洗或进样中产生的气泡也会干扰测定;同时繁琐冗长的冲洗过程也会成为提高检测效率的瓶颈。另外,使用磁性或非磁性微粒时,强烈的散射吸收作用也会降低灵敏度。
1.2 按发光持续时间分类:可分为闪光和辉光两类,闪光型发光时间在数秒内,如吖啶酯系统。其检测方式一般采用原位进样和时间积分法测量,即在检测器部位加装进样器,并保证加入发光剂和检测2个过程同步进行;同时以整个发光信号峰的面积为发光强度。而辉光型发光时间在数分钟至数十分钟以上,如HRP一鲁米诺系统、ALP—AMPPD系统、黄嘌呤氧化酶-鲁米诺系统等。其信号检测无需原位进样,一般以速率法测量,即在发光信号相对稳定的区域任意点测量单位时间的发光强度。
测量化学发光反应的光强度,求得某些化学物质和生物物质的含量,尤其与免疫学方法结合以后形成的化学发光免疫测定法(CLIA),其既具有发光检测的高度灵敏性,又具有免疫分析的高度特异性,检测快速,试剂无放射危害,检测限达10负15 mol/L。

1.3 评价:化学发光标记物已广泛应用于抗原、半抗原和抗体的检测,与放射性核素标记物相比较,它的优点在于安全(无放射危害)、稳定、测量快速、灵敏度高、线性范围宽、自动化程度高、减少了人为的误差。检测快速缩短了等待结果的时间,无需批量检测可随到随测保证及时提供结果。缺点在于一般化学发光是标记催化酶或化学发光分子的发光反应,一般发光不稳定,为问断的、闪烁性发光,而且在反应过程中易发生裂变,导至反应结果不稳定。此外。检测时需对结合相、游离相进行分离,操作步骤多,测试成本高。主要问题是化学发光的产生通常是瞬间完成的,发光的峰值很快衰减,再是本底较高和干扰妨碍应用。

来源:乐融

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发表于 2015-3-26 16:02:45 | 显示全部楼层
谢谢   非常看好
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发表于 2015-10-26 21:51:17 来自手机 | 显示全部楼层
谢谢楼主分享
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发表于 2015-11-21 20:54:38 | 显示全部楼层
感觉不是很专业啊
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