D-dimer 技术报告

检验医师

纤维蛋白原是凝血系统的主要蛋白。它含有两个相同的亚基，每个亚基都由α、β和γ三个多肽链组成。纤维蛋白原经凝血酶作用生成纤维蛋白，随后的纤维蛋白聚合导至血液凝固。纤维蛋白凝块被纤维蛋白溶酶切割，产生不同分子量的纤维蛋白降解产物，并被释放到血液中。

D-二聚体是纤维蛋白降解的最终产物（分子量180 kDa，图1）。它含有三个多肽链的降解产物，并通过二硫键交联。二聚体结构通过γ链C端之间的两个异肽键形成交联结构而保持。

健康个体的D-二聚体水平低于0.5 μg/ml。在肺血栓栓塞、深静脉血栓形成、动脉粥样硬化以及其他心血管疾病患者血液中，D-二聚体的水平均有所升高。血液中D-二聚体水平的升高意味着心肌梗死的风险，被认为是大多数心血管疾病病理凝血的一个可靠标记物[1, 2]。它还被广泛用于排除深静脉血栓形成[3]。而且，没有血栓症状的D-二聚体水平升高提示恶性肿瘤的存在。

为了准确的检测D-二聚体，检测系统必须不能识别纤维蛋白原和它的降解产物（D-单体）。HyTest提供D-二聚体和抗D-二聚体单抗，D-二聚体是从纤维蛋白原凝块中通过纤维蛋白溶酶切割产生的。

1. 人D-二聚体

来源：人血浆

纯度：>90%

物理状态：冷冻干燥品

应用：D-二聚体免疫标准品，生物化学和免疫化学研究

保存：-20℃

十多年来，HyTest一直是世界上D-二聚体抗原的最大供应商，我们提供的抗原被检测试剂制造商用作标准品或校准品。我们提供从人血浆凝块中高度纯化的D-二聚体。

图1. D-二聚体非还原性SDS凝胶电泳

泳道1：分子量标准品

泳道2：D-二聚体（3 μg）

凝胶染色：考马斯亮蓝R-250

2. 识别D-二聚体交联部位的抗体

宿主动物：Balb/c小鼠

融合用细胞系：Sp2/0

抗原：纤维蛋白凝块、纤维蛋白降解多肽、D-二聚体

提纯方法：蛋白A亲和层析

物理状态：单抗溶于PBS，并含有0.1%叠氮钠

应用：D-二聚体免疫检测系统、交联纤维蛋白降解产物和D-二聚体免疫印记检测

杂交瘤细胞由Sp2/0骨髓瘤细胞和用同质化凝块、纤维蛋白降解肽或D-二聚体免疫的Balb/c小鼠的脾细胞融合而产生。

2.1. 识别D-二聚体交联部位的抗体

HyTest提供一种新的独特单抗DD93，可以识别D-二聚体交联部位。它可以在还原性和非还原性条件下的免疫印记分析中检测到D-二聚体的交联γ链。

2.2. 识别D-二聚体和高分子量纤维蛋白降解产物的抗体

HyTest提供单抗DD1、DD2、DD3、DD22、DD41、DD44和DD46，它们都可以特异性识别D-二聚体。这些单抗与纤维蛋白原无交叉反应。单抗DD1、DD2和DD3不与D-单体发生交叉反应。单抗DD22、DD41、DD44和DD46与D-单体在直接酶免分析（D-单体包被在板上）中无交叉反应（或很低的交叉反应），而在夹心免疫检测中有一些交叉反应。与D-单体在夹心免疫检测中交叉反应的程度取决于抗体对中第二个单抗的特异性。

2.3. 识别D-二聚体、纤维蛋白原和D-单体共同部位的抗体

单抗DD4、DD5和DD6识别D-二聚体和高分子量纤维蛋白降解产物，但是与纤维蛋白原也有交叉反应，并与D-单体有轻度的交叉反应。这些单抗只能在D-二聚体两步夹心定量分析中用作检测抗体。

2.4. 应用

2.4.1. D-二聚体一步免疫检测系统

HyTest推荐用于人血浆D-二聚体一步定量免疫检测系统的两个单抗组合为：

DD2 – DD41

DD2 – DD44

推荐的组合可以特异性识别交联物质（D-二聚体和高分子量纤维蛋白降解产物），不与纤维蛋白原、纤维蛋白原降解产物或D-单体发生交叉反应（图3）。

2.4.2. D-二聚体两步免疫检测系统

下列抗体对可用于人血浆D-二聚体两步夹心免疫检测系统：

DD1 – DD6

DD2 – DD6

DD1 – DD5

DD2 – DD5

DD1 – DD4

DD2 – DD4

推荐的组合可以特异性识别样品中的交联物质，不识别纤维蛋白原、纤维蛋白原降解产物或D-单体。由于所有检测抗体都与纤维蛋白原发生交叉反应，我们强烈推荐在两步检测系统中使用这些抗体对。第一步，孵育捕获抗体和血浆样品。第二步，孵育免疫复合物（捕获抗体-抗原）和检测抗体以形成夹心复合物。为了避免非特异性结合，血浆必须被稀释至少两倍以上，再进行夹心免疫检测分析。稀释时使用含有1M NaCl和0.1% Tween 20的10 mM Tris-HCl，pH 7.5缓冲液。

2.4.3. D-二聚体免疫印记检测　

抗D-二聚体抗体可被用于免疫印记分析。单抗DD1识别D-二聚体，不识别纤维蛋白原、D-单体或巯基乙醇处理的D-二聚体（图4）。表1总结了不同单抗免疫印记检测D-二聚体的详细信息。

来源：hytest