极限PCR：可在15-60s内高效、特异地扩增DNA

青草

PCR是分子生物学和诊断学中的一项关键技术，通常能在一个小时左右的时间里扩增和定量特定的DNA片段。然而，PCR的动力学限制尚属未知。近日一篇发表在《临床化学》（Clinical Chemistry）杂志上的文章评估了极限PCR的可行性。

研究人员开发了雏形仪器，在0.4-2.0 s的时间内，1-5 μL的样品用62 °C-76 °C的退火/延伸温度和85 °C-92 °C的变性温度进行温度循环。引物和聚合酶浓度比传统浓度增加10-20倍，用以匹配更快的温度循环的引物退火和聚合酶延伸的动力学。研究人员通过琼脂糖凝胶电泳和高分辨率熔解曲线分析评估了分析特异性和产量。通过实时监测显示扩增效率和分析的灵敏度。

使用人类基因组DNA的单拷贝基因，研究人员在15-60s内扩增了45-102 bp的目标基因。琼脂糖凝胶电泳在预期大小处显示明亮的单一条带，高分辨率熔解曲线显示单一产物且未使用任何“热启动”技术。利用0.8-1.9 s周期的单分子灵敏度的扩增效率是91.7%-95.8%。在14.7 s中使用35个循环扩增了一个60 bp的目标基因组。

PCR所需的时间与关键反应物的浓度成反比。通过增加10-20倍引物和聚合酶浓度、0.4-2.0 s的温度循环，高效（>90%）、特异、高产地从人类DNA中扩增产物的PCR可以在15 s内完成。极限PCR证实，传染病、检测取证、和即时结果可能至关重要的所有应用中，实现等待时进行检测是可行的。


信源地址：http://www.clinchem.org/content/61/1/145.full

来源：

Alabmed

huangchj03

这个实验说明一点，我们对PCR得理解还存在很多误区。