干货分享！盘点几种组织切片时处理要点

生物科研实验室

一、淋巴结组织处理要点
1、淋巴结组织特性为结构紧密、细胞繁多，取样时需确保组织片厚度均匀，推荐0.2-0.3cm为最佳；
2、因淋巴结外包一层坚韧的结缔组织膜，阻碍液体渗透，故固定时间需延长至6-12小时，甚至可整夜固定，次日与常规组织同步脱水。若采用中性甲醛固定及乙醇脱水，两者时间均需加倍，同时可适当缩减二甲苯透明步骤的时间；
3、切片时，目标厚度为2-3μm，此厚度下组织易碎，展片时易出现皱褶、裂隙及不平整。因此，蜡块不宜过度冷冻，修至最大面后，以拇指轻沾温水预热5-6秒，迅速用冰块冷却3-4秒后立即切片，此法可确保切片完整无裂，且连片效果好；
4、展片水温需控制在35℃左右，过高难以消除小皱褶，过低则导至切片不平、贴片不牢易脱落；
5. 苏木精染色时间需短于常规，约3-5分钟即可，或专为淋巴结等实性组织设计一套染色程序。
二、脂肪组织处理要点
脂肪组织内含丰富脂肪滴，难以被脱水剂彻底溶解，石蜡渗透亦不充分，导至组织固定困难。固定旨在增加组织硬度，便于后续制片。因此，关键在于延长固定与浸蜡时间，同时取材不宜过厚。
切片时，需修至最大面，随后以冰块贴附蜡块冷却5-10秒，迅速切片。低温能使未完全脱透的脂肪滴暂时凝固，确保切片完整。切片厚度建议设为5-6μm，裱片与捞片操作需迅速，且裱片温度需控制在42℃以下。
三、骨髓及骨组织处理要点
骨髓与骨组织制片中，脱钙步骤至关重要。骨髓组织常用7%盐酸水溶液进行脱钙，因组织硬度各异，脱钙时间需灵活调整。
时间过短，组织过硬，切片易散；时间过长，组织色泽发灰，影响诊断。骨髓组织脱钙至漂浮状态即可，一般需2-5分钟。骨组织切片前亦需脱钙，常用17%硝酸水溶液，处理时间为12-24小时，或直至大头针能轻易穿透。
切片前，蜡块需缓慢、薄层修整，尤其是薄骨片，以避免切片时损失骨组织。烤片时间需适当延长，以确保贴片牢固，防止脱片。
四、皮肤组织处理要点皮肤组织层次丰富，结构复杂，各层致密程度不一，故脱水时间可适当延长。包埋时，需确保皮肤及其皮下组织位于同一平面，以保障切片能完整展现皮肤各层结构。
切片时，应将蜡块中皮肤组织表层朝上固定于切片机，遵循由里至外的原则，最后切割角质层。此操作有助于制作完整的切片，因角质层密度高，易碎裂，故烤片时间可适当延长，以增强贴片牢固度，防止脱片。
五、脑组织处理要点
脑组织质地疏松，组织量少，且柔软易损。取材时，建议厚度控制在2mm以内。脱水效果不佳会影响浸蜡质量，因此可适当增加脱水时间。脱水后的脑组织变得更为脆弱，包埋时需轻柔操作，避免重压导至组织破损。
切片时易粘刀，且皱褶难以展开，故需在冰箱中冷冻更长时间。切片方法可参考淋巴结组织处理，展片时，可先置于凉水中使小皱褶完全舒展，再转移至载玻片，于展片机中充分展开。烤片时间需严格控制，不宜过长。