WB 实验结果的分析方法有哪些？

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WB 实验结果的分析方法有哪些？
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大力水手

WB（Western Blot）, 即蛋白印迹或免疫印迹（immunoblotting），是一项在分子生物学、生物化学、免疫学等领域中应用非常广泛的技术。这一技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用，根据显色条带的位置和强弱实现蛋白鉴定表达分析。WB技术具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的搞特异性和敏感性。选用合适的内参抗体能够校正蛋白定量和上样过程中的误差，通过灰度计量可以定性或定量分析不同样品中蛋白表达情况。载基提供WB检测技术服务，提供编码基因表达水平的确凿证据，用于特定基因调节，基因功能研究，也可以作为蛋白芯片、蛋白质谱的验证实验。
WB条带灰度值分析怎么做？？？
具体步骤如下：
1、将内参蛋白图片文件拖入Photoshop中进行调整和截图，得到平整的条带图


2、进行同样操作，将目的蛋白条带截出（三个重复，本次以其中一个作为演示）


3、将截好的条带拖入Image J软件中，点击矩形工具，进行框选，最好逐一条带进行框选，减少误差


4、点击Ctrl+1,2,3，得到波峰（如果有开口，用直线工具将开口的波峰关闭，形成密闭空间）


5、使用魔棒工具，点击波峰可以显示波峰下的面积，即条带的灰度值


6、将所有灰度值汇总到Excel表格中


7、将目的蛋白的灰度值除以内参蛋白的灰度值


8、以组间对照组为1，其余组除以对照组的平均值，再次进行归一处理


9、求平均值


10、求SD值（标准差值），第一次归一处理的SD值与第二次归一处理的SD值相等。第一次的需除以对照组的平均值。（对照组的SD值需以第一次归一的数值进行处理）


11、以第一次进行归一的值求显著性差异（P-value）


12、得各组平均值、标准差、显著性，进行作图


13、在GraphPad Prism软件中输入对应数据


14、得最终柱状图，纵坐标为蛋白相对比率，横坐标为组别

检验医师

1、在百度上搜索Image J软件然后下载到电脑上安装完毕。安装好Image J软件后，将你做的WB的片子进行扫描，得到扫描版图片。

2、完成步骤1后，装好Image J软件后，点击软件上方的File，下拉点击Open，将扫描图片拉入进入软件中。接着点击软件上方的Image，下拉第一个是Type，点击，将其改为8-bit。

3、点击analyze，下拉点击set measurement，点击图中所勾的四个选项。然后点击ok确定。然后点击process，下拉点击substract background，只勾图中light background一个选项，点击ok即可。

4、完成第三步后，点击analyze，下拉出现set scale，点击它，弹出一个小框，把unit of length 那个空白框内的英语改为pixels，点击OK即可。

5、完成前四步后开始点击file下方一些列不规则圆圈，选择心型圆圈，点击出现freehand selections。然后点击Edit，下拉出现invert，点击即可。

6、最后一步，进行灰度统计。用鼠标选择图中亮色区域，尽可能的把亮色区域全部圈起来。然后点击anlyze下拉出现的measurement，即可弹出你选定区域的灰度统计值。