流式细胞分析的结果分析图怎么看？

HaHa

就想这样的图片，中间有一个方框的该怎么分析？



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大力水手

什么是流式细胞分析
流式细胞分析是一项实验室细胞分析技术，可根据细胞物理和荧光特性，鉴定和/或分选异质悬浮细胞群。是一种单细胞分析方法，非常适合同时获取大量细胞的单细胞水平定量信息，包括给定类型细胞数目和细胞内特定蛋白含量。
流式细胞分析的部分优势包括快速、可在研究异质细胞群时区分不同细胞亚群的差异，同时支持分析异质性细胞群的亚群。流式细胞分析常用于免疫分型和免疫肿瘤学研究，可分析血液、骨髓和其他样品类型的血液学差异。
流式细胞分析工作原理
流式技术依靠流体动力聚焦技术使细胞悬液样品形成一股单细胞液流，通过激光束。根据细胞对入射光线的散射情况，可每秒数千颗粒的速率，检测细胞大小和胞内复杂情况。随后即将生成的模拟数据转化为数字数据，进行定量和绘图分析。
根据流式细胞测定结果，可确定特定的细胞群和其亚群并通过细胞分选法物理分离，此时会根据细胞的荧光特性控制其电荷大小，从而实现细胞颗粒的静电偏转。如需更精细地鉴定亚群，则要使用探针。贴壁细胞和实体组织成功分离并制成单细胞悬液后，也可采用该技术进行分析。
常见流式细胞分析示意图



传统流式细胞仪组件
关于流式细胞分析的最低配置，即使是最基础的单激光流式细胞仪，一般都会配置至少同时检测4种荧光染料的滤光片。目前，单次实验中最多甚至可区分18种波长的光线。
传统流式细胞组件包括：
用于样品处理和细胞分选的液流系统
——流动室：样品中的细胞通过流体动力学聚焦并流经激光照射区。
用于荧光检测的光学系统
——光通过一系列镜片和滤光片。
——根据大小、内部复杂成分和信号强度检测细胞。
用于信号处理、计算机显示和分析的电学系统
——光电倍增管将光信号转换为电信号。
——信号随后放大和数字化。
流式免疫检测
同其他免疫检测应用一样，流式细胞分析也可通过多种方法利用抗体探测特定的细胞基元。两大最常用方法为：直接检测法和间接检测法。
直接检测法
直接检测法是一种一步染色工艺，通过一抗特异性结合目标抗原，可直接结合支持成像或其他结合状态检测的分子。探测位于细胞表面的抗原时，不建议固定细胞，否则可能导致抗体探针无法接触目标抗原。因此，在数据采集结束前保持细胞活力十分重要。
间接检测法
间接检测法先用纯化抗体与目标抗原孵育结合，再用荧光染料标记的二抗（特异性靶向一抗宿主同型）与一抗特异性结合，形成一抗-荧光二抗复合物。采用纯化一抗搭配各种波长（或颜色）的荧光染料标记二抗（特异性针对生产一抗的宿主同型）可提升抗体库的模块化程度。
直接检测法和间接检测法流式分析对比


流式细胞分析方案主要步骤
流式细胞分析方案主要分为4个步骤：
样品制备：应通过机械分离方法或化学解离技术制备单细胞悬液，如采用酶溶液或钙螯合试剂。
封闭：通常采用抗Fc抗体稀释液悬浮细胞，防止一抗非特异性结合。
抗体孵育：流式细胞分析的孵育步骤涉及多种组分，包括一抗、二抗、链霉亲和素和荧光染料。
数据采集：大多数流式细胞仪都配备获取和转化细胞特征信号必需的软件。用户可根据自身实验要求设定具体的软件参数。
适当的对照
除了目标细胞之外，每次进行流式细胞实验还应包含以下对照：
至少一份未染色样品，与试样同时进行每一步的缓冲液孵育，以优化实验的流速和电压。
一份适当的阴性对照样品，与试样基本相同，但用在一抗的宿主种属中生产的同型对照替代试样中的一抗。该对照用于非特异性结合二抗。
如有需要也可准备一份已知表达所有目标抗原的细胞组成的阳性对照，并与试样共同孵育，但仅用单色检测。
产品推荐

产品编号	产品名称	质量规格
PS1349	PBS-BSA溶液	3%BSA
PS0165	EDTA溶液	0.5mol/L,pH8.0
PS0261	多聚甲醛溶液	4%PFA
PS0528	胰蛋白酶-EDTA 溶液	0.25%,含酚红
PS0287	红细胞裂解液	RBC Lysis buffer,10×
PS0171	PBS-BSA溶液	1%BSA
PS0295	PBS磷酸盐缓冲液	1×,pH7.4,无菌
P70002	碘化丙啶（PI)	≥94%(HPLC)
F80001	异硫氰酸荧光素(FITC)	≥95%
P13213	PerCP	Mw:~35,000
S10065	磺基罗丹明101(TR)	≥98%(HPLC)
A14290	别藻蓝蛋白(APC)	Mw:~105,000
A14291	串联染料APC-Cy5.5	-
A14292	Alexa Fluor 488 SE	活化酯分子量:～900
C10546	Cy3 NHS酯	≥95%
S10386	Cy5	≥95%
A14298	Pacific Blue 琥珀酰亚胺酯	-
D10112	DAPI	≥98%(HPLC),荧光级
A70550	7-氨基-4-甲基香豆素	≥97%
A11034	7-Aminoactinomycin D(7-AAD)	≥95%
B70035	赫斯特荧光染料 33342	≥99%
C10680	色霉素A3	≥98%
C10362	CFSE	≥90%(HPLC),用于荧光分析
D70007	DCFH-DA	≥97% (HPLC)

卡卡

今天给大家介绍一下流式结果中坐标轴的显示方式、对数和双指数的转换及坐标轴的调整。
常用的三种流式图的坐标轴显示方式，包括Linear（线性），Logarithmic（对数），Biex（双指数），如图1。



图1：小鼠脾脏样本，三种坐标轴结果左：FSC和SSC坐标轴均为Linear（线性）中：SSC坐标轴为Linear（线性）；CD3坐标轴为Logarithmic（对数）右：SSC坐标轴为Linear（线性）；CD3坐标轴为Biex（双指数）

01 Linear（线性）

Linear（线性）坐标轴刻度呈线性递增。其优点是，当检测信号跨度范围较小时，能更明显地呈现显示范围内信号的差异。常见使用Linear（线性）呈现方式的有：细胞直径FSC（前向散射）、细胞内颗粒度SSC（侧向散射）以及细胞周期实验中的DNA含量等。
其缺点是，在分析跨度范围较大的荧光信号时，Linear坐标轴不能很好地展示荧光信号，如图2左。



图2：人外周血样本，CD4和CD8，线性和对数坐标轴结果对比左：CD4和CD8坐标轴均为Linear（线性）右：CD4和CD8坐标轴均为Logarithmic（对数）

但也有特殊情况——例如，在外周血免疫分型的分析中，为了使粒细胞群分辨得更清楚，可以在SSC坐标轴选择对数，如图3右。



图3：人外周血样本，SSC，线性和对数坐标轴结果对比左：SSC坐标轴为Linear（线性）；CD45坐标轴为Biex（双指数）右：SSC坐标轴为Logarithmic（对数）；CD45坐标轴为Biex（双指数）

02 Logarithmic（对数）

Logarithmic（对数）坐标轴刻度呈指数递增。其优点是，在检测信号跨度范围较大时，使群体更聚集，能更明显地呈现显示范围内信号的差异。常见使用Logarithmic（对数）呈现方式的有：流式抗体检测、Annexin V凋亡检测等实验检测的荧光信号。
其缺点是负值信号问题，即在某些检测结果中（因为阳性信号过强或电压设置较低），坐标轴选Logarithmic会发现有些信号压轴或者显示不出来（可通过画门观察百分比），见图4左。



图4：小鼠脾脏样本，CD8，对数和双指数坐标轴结果对比左：SSC坐标轴为Linear（线性）；CD8坐标轴为Logarithmic（对数）右：SSC坐标轴为Linear（线性）；CD8坐标轴为Biex（双指数）

03 Biex（双指数）

Biex（双指数）坐标轴刻度呈指数递增。其优点是，数值较小时具有线性的优势，能展示细节；数值较大时具有对数的优势，群体更聚集。常见使用Biex（双指数）呈现方式的是存在负值信号（荧光信号较弱）的各种流式及相关的实验结果。
其缺陷在于，Biex是自动根据最小值计算的，如果标本有极少数异常细胞荧光强度特别低，阴性群体和弱阳性会被压缩，视觉上群体的分布就改变了，甚至可能在荧光强度较低的区域出现两群信号，见图5右。因此，我们会发现很多仪器默认的荧光通道坐标轴是Logarithmic（对数），而不是Biex（双指数）。



图5：小鼠脾脏样本，CD8，对数和双指数坐标轴结果对比左：SSC坐标轴为Linear（线性）；CD8坐标轴为Logarithmic（对数）右：SSC坐标轴为Linear（线性）；CD8坐标轴为Biex（双指数）

小结

◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
最后来给大家总结一下：
当检测信号跨度范围较小，如FSC、SSC以及细胞周期的DNA含量，其坐标轴基本选择Linear（线性），特殊要求除外；
当检测信号跨度范围较大，如抗原指标的荧光信号，坐标轴多选择Logarithmic（对数）；
如果需要分析的荧光信号接近负值区域，坐标轴可以选择Biex（双指数）。

卡卡

<span class="nolink">上一期文章中我们为大家介绍了流式实验流程中的实验设计、样本制备和样品染色，还没有阅读过的小伙伴可以先点击《流式细胞术实验流程》阅读后，再阅读本期文章哦！
赛尔普生物：史上最全 | 流式细胞术实验流程！3个步骤拿下！<hr/>

《实验Protocol大全》，包含以下内容，有需要自取（文末还有！）
1）实验与Protocol-表型确认
2）实验与Protocol-分子机制
3）实验与Protocol-细胞交互
4）实验与Protocol-直接作用机制
5）中文版69个实验protocol大全--DNA技术+PCR技术+RNA技术+蛋白质技术+感受态技术+细胞技术
6）1502页的实验指南
7）14类实验课程+PCR
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11）实验技术及原理指南

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<hr/>一、样品读取

1）在设置仪器电压时，须遵守两个基本规则：

背景信号应位于对电子噪声贡献最小的区域。
阳性信号必须在标度范围内，处于检测器的线性范围内。

在设置电压时，通常可从仪器校准后的仪器设置开始。检查每个通道的阳性信号是否在标度范围内（图1）。若阳性信号过高，可降低通道电压，以确保染色的群体在标度范围。此步骤对于检测实验所使用的细胞是必需的，但对于其他试剂如捕获微球并非必需。



图1

图1：超出标度范围的电压vs.最佳电压。在设置流式细胞术的电压时，必须确保所有阳性信号都在标度范围内（在仪器可检测到的荧光限度内）。若电压设置太高（a），则阳性信号太亮，无法分辨。设置时必须始终注意，确保阳性信号在标度范围（b）。

2）利用单染对照进行补偿
在为每个通道设好最佳电压之后，接着测量补偿值。
注意：

由于抗体捕获微球具有高的结合能力，故不建议使用补偿微球来设置（或重设）电压。如果信号饱和，则降低在捕获微球上使用的抗体效价。
对于每个补偿对照，每个通道的电压必须相同。运行每种荧光染料对照，确保收集到足够多的阳性事件，并准确计算补偿值。补偿值可在釆集前利用仪器软件自带的算法来计算，也可在数据釆集后利用流式细胞术分析软件来计算。

3）应当收集多少事件?


对于稀有群体，收集更大量的事件才能获得有重现性的结果。在一百万个细胞中寻找一个细胞，需要收集超过10000个细胞，甚至1000000个细胞。不过，这既没有严格的规则，也没有所谓“正确的”数字。使用正确的对照，了解所研究系统的生物学，才是最佳的入手点。
<hr/>二、分析

流式细胞术的数据分析软件通常使用含有一系列数据图的工作表来实现数据可视化。单参数（直方图）或双参数（散点图）显示了每种标志物的表达模式（图2）。通过设门来明确数据边界并分离具有共同表型特征的细胞，从而识别和分离感兴趣的细胞群体。利用层层设门或布尔逻辑可以缩小目标群体的范围。根据门内的数据点（如频率）进行统计计算。



图2

图2：直方图、散点图和设门层次结构。利用CD3/CD28抗体刺激人CD3+T细胞7天。接着用hCD4抗体（R&DSystems货号FAB3791）、hCD8抗体（R&DSystems货号FAB1509）和hCD25抗体（R&DSystems货号FAB1020）对细胞进行染色。（a）绘制细胞群（P1）、单细胞群（P2）和活细胞群（P3）的图。hCD8的未设门（b）和设门（c）直方图。hCD4和hCD25的未设门（d）和设门（e）二维散点图。设置各种门的hCD4和hCD25的二维散点图。多边形门内是CD4+CD25T细胞群、长方形门内是CD4+CD25+T细胞群，椭圆形门内是CD4+CD25+细胞群（e）。设门层次结构如（f）图所示，其中CD8+直方图门（c）是P1、P2和P3的子门；CD4/CD25散点图（e）上显示的门（P5-P7）也是如此。

1）文件格式-FCS文件
流式细胞仪可以生成以FCS（流式细胞术标准）文件格式的数据。FCS文件由国际流式细胞协会（ISAC）的数据标准工作组建立和维护，提供了“完整描述流式细胞术数据集所需的规格”以及可在不同软件平台中分析的统一文件格式。
2）文件注释
FCS文件包含了许多可在分析期间使用的关键词。其中一些是标准文件所必需的，由制造商的软件自动填充。另外一些关键词需要用户输入。

流式细胞术实验最低信息标准（MIFIowCyt）概括了数据注释的最佳做法，是ISAC公认的标准3。
注释包括样品名称、标志物/染料名称、处理方法等。
上方的表格源于MIFIowCyt文献，列出了一份更详尽的清单。根据最佳做法，实验变量的详细信息应与数据文件相关联。

3）数据分辨率和呈现
数据换算——每台流式细胞仪将获得的荧光信号处理成数字信号，并按一定的组距对荧光信号进行处理。组距的数量决定了数据的精度，通常用比特（Bits）表示。一般来说，获取数据的精度在10到24比特之间。数据可在线性或对数模式下获取，具体取决于荧光群体的动态范围（图3）。



图3

图3.线性放大vs.对数放大。对于DNA含量分析等应用，从G1期到G2期的荧光存在线性变化，其中G2期的DNA量是G1期的两倍，这就需要数据的线性显示（a）。对于其他大多数应用（如免疫表型分析），当荧光水平在大的动态范围内变化时，数据是以对数模式获取的（b）。



图4

数据转换——数据转换是另一种工具，用于显示具有高动态范围的数据。在流式细胞术中，数据转换有助于观察因背景扣除和扩散误差而落在零附近的数据点。这些数据点被分配到第一个对数通道，导致事件在轴上堆积4,5。双指数（Biexponen­tial）和hyperlog是数据转换时常用算法（图4）。数据转换压缩了低于零和高于零的数据，以便更准确地观察这个较小范围内的数据。

图4.对数vs.双指数数据换算。利用CD3/CD28抗体刺激人CD3+T细胞7天，然后用hCD8抗体（R&DSystems货号FAB1509）和hCD25抗体（R&DSystems 货号FAB1020）对细胞进行染色。对数换算显示在（a）图，而双指数换算显示在（b）图。

4）数据清除
与其他技术一样，流式细胞术也很容易因仪器问题、样品制备问题或操作失误而产生异常数据。这对质控来说很重要，如有必要可清除异常数据，避免错误解读。数据清除时的设门策略包括：
间设门——记录样品的持续时间是每个FCS文件中包含的参数。这可以与散点图中的其他任意参数作图，以寻找流体系统的不稳定性。例如，在出现堵塞或气泡的情况下，用户可对异常值以外的持续时间进行设门，以确保测量的荧光没有错误（右图）。
在某些情况下，一旦问题得到解决，可能需要从分析中删除样品信息或重新记录数据。在釆集过程中也可以监控此时间图，以便及时发现和解决问题。



图5

图5：低速vs.高速采集时间图。利用hCD45抗体（R&DSystems货号FAB1430）对PBMC进行染色，并在Fortessa上低速（a）或高速（b）釆集样本。（a）低速（~2000个事件/秒）釆集在时间对CD45双参数图上显示出稳定的液流，而高速（8000个事件/秒）采集（b）显示出液流的多次中断。

散射光设门——根据细胞形态和光散射特征，FSC和SSC双参数图可提供细胞的粗略视图（图6）。在FSC参数上设置阈值可以排除检测中的噪声。阈值决定了将电信号计为事件所需的最低值。此外，散射图可提供了解死细胞数量、碎片量和细胞团块的概况，可作为初始数据清除门。或者，散射门可在时间设门和单细胞设门后设置，作为活细胞设门之前的数据清除门。
单细胞设门——流式细胞术是一种单细胞水平的检测技术。但是，细胞有可能粘在一起，或串联通过分析点。若在分析时没有处理细胞团块（包含感兴趣的细胞和阴性群体），则会导致结果不准确。
单细胞设门通过测定电脉冲信号的高度（H）、宽度（W）和面积（A）参数来区分单细胞群和粘连细胞群。结合两种脉冲参数值，能够鉴定出粘连细胞群，并对单细胞群体设门（图6b）。在一些应用中，对荧光标志物（如DNA结合染料）进行单细胞群设门可能很有用。注意：并非所有这些脉冲测量值都自动包含在数据文件中，因此在分析之前切记在软件中先设置好。



图6

图6.排除粘连细胞，对活细胞（a）设门后利用FSC-Avs. FSC-H可以识别单个细胞群和粘连细胞群（b），（c）图显示了FSC/SSC图上粘连细胞群（绿色）和单个细胞群（蓝色）的重叠。

活细胞设门——当样品中存在死细胞时，可能会影响数据分析。在理想的情况下，样品制备过程应当尽量减少细胞死亡。细胞活力染料有助于将死细胞排除在后续分析之外。根据需求，活力染料可对散射参数或某一荧光标志物作图（详见图7）。



图7

图7.通过细胞活力染料检测凋亡细胞。KG.1细胞未经处理（a和c），或经过5μM喜树碱（TocrisBioscience货号1100）处理12小时，以诱导细胞凋亡（b和d）。收集细胞，并用胺基活性染料（a和b）或AnnexinV（c和d）标记。在胺基活性染料或AnnexinV标记后显示阳性荧光的细胞为死细胞。胺基活性染料与AnnexinV识别的死细胞比例有差异，主要是因为AnnexinV识别早期和晚期凋亡的细胞，而胺基活性染料只在质膜变得多孔后标记晚期凋亡细胞。

<hr/>其他设门策略
DUMP通道——对于流式细胞术的某些组合，可能需要将多个类型的细胞排除在后续分析之外。这种情况下可使用dump通道。通常利用相同染料标记多个不同细胞的标志物，通过对阴性群体设门，区分那些标志物呈阳性的细胞类型，并排除在分析之外（图8）；



图8

图8.利用谱系标志物的dump通道来识别人血液样本中的树突细胞。血液树突细胞是人血液中的少量细胞群体，存在于淋巴细胞群中。对淋巴细胞/单核细胞设门（a），然后确定血液树突细胞为HLA-DR+、“Lin”阴性（CD3-CD14-CD19-）的细胞（b）。为了便于血液树突细胞的检测，利用谱系标志物CD3抗体（R&DSystems货号FAB100）、CD14抗体（R&DSystems货号FAB3832）和CD19抗体（R&DSystems货号FAB4867）建立“Lin”的dump通道。所有这些抗体都用AF405标记。根据其他细胞表面蛋白的表达，如CD11c（R&DSystems货号FAB1777）和CD16（R&DSystems货号FAB2546），将HLA-DR+Lin-细胞进一步分成不同群体（c）。散点图（d）显示了不使用dump通道时CD11c和CD16群体的大小和分布。

荧光减一对照——某些群体可能难以鉴定，因此如何设置门边界成为一大挑战。在这些情况下，荧光减一对照（FMO）能够更准确的设门。FMO对照的染色方式与样品相同，但减少了一种目标标志物的染色。这种对照显示了除一种试剂外其他试剂贡献的背景荧光，从而更准确地指导设门的边界（图9）



图9

图9.FMO和同型对照的图示比较。使用αCD3/αCD28抗体（分别为5 μg/mL和2 μg/mL）刺激CD3+T细胞9天。收集细胞，并用AF647标记的CD4抗体（R&DSystems货号FAB3791R）、PerCP标记的CD8抗体（R&DSystems货号FAB1509C）和PE标记的CD25抗体（R&DSystems货号FAB1020P）对细胞进行染色。（a）为CD25的FMO对照，即用除一种抗体（CD25PE）外的其余所有抗体（CD4AF647和CD8PerCP）染色细胞。（b）为CD25的同型对照，使用CD25PE的同型对照MslgG2a PE抗体加上CD4AF647和CD8PerCP染色细胞。（c）为全染样本，使用所有三种一抗（CD4AF647、CD8PerCP和CD25PE）对CD3+T细胞进行染色。当MslgG2a PE同型对照抗体和相应的CD25PE抗体的浓度被正确滴定时，（a）图中CD8+细胞在PE通道中的MFI为143而（b）图中CD8+细胞在PE通道中的MFI为169。

反向设门——反向设门是一种非常有用的设门策略，可用于验证门是否能正确鉴定、且未排除任何感兴趣的事件。在分析软件中可以对细胞群体进行着色，以便轻松区分这群细胞在其他图中的分布（图10）。如有需要可调整门，从而更好地圈出感兴趣的细胞，或排除不想要的细胞。
<hr/>统计数据：流式细胞术主要使用两种数据值：频率和荧光强度（图11）。

频率表示特定群体在整个样品或细胞亚群中的比例。
荧光强度在对数数据中应该为荧光强度中位值（MFI，其中M代表中位数）。在比较不同实验（特别是不同仪器）的MFI时应当谨慎，因为仪器配置和设置会极大地影响该值。为了实现准确的比较，可能需要使用微球校正MFI，配合电压调整，从而使仪器的设置统一标准化。

图10

图10.利用反向设门检测特定的细胞群体。ViaFluor®405（2.5 μM）标记活化的NK细胞，并用CAM（0.1 μM）标记K562细胞；两者都在37­°C下静置30分钟，然后开展杀伤实验。以0.5:1（NK细胞:K562细胞）的比例混合细胞。上面的散点图显示了混合细胞群的FSC/SSC分布（a）。通过对ViaFluor®405标记的NK细胞和CAM标记的K562细胞进行反向设门（b），以显示它们在FSC/SSC点图中的相对分布（a）。



图11

图11.统计数据的分析。将纯化的CD4+T细胞经过5天极化为hTh17细胞。使用Tocrisreactivation cocktail （TocrisBioscience货号5476）再次刺激后，用细胞活力染料和CD3抗体对hTh17细胞进行染色。使用FoxP3buffer kit（R&DSystems货号FC012）染色胞内IL-17A。在Fortessa上读取分析数据。（a）散点图显示了淋巴细胞门（P1）、单细胞门（P2）、活细胞门（P3）和CD3+IL-17A+T双阳性细胞门（Q2）（抗体分别为R&DSystems货号FAB100F和R&DSystems货号IC317P）。（b）图显示了每个散点图的分群结构，并且通过箭头显示了对应每个散点图的门（上图）。细胞数量、占上级细胞群的百分比（频率）以及CD3FITC、细胞活力AlexaFluor® 405和IL-17APE的MFI值等统计数据均呈现在最下方图中。

参考文献：1.RoedererM. (2008) How many events is enough?Are you positive?Cytometry A.73(5):384-5.PMID: 183072572.DonnenbergAD,Donnenberg VS.(2007) Rare-event analysis in flow cytometry. Clin LabMed.27(3): 627-52.PMID: 176584103.LeeJA, Spidlen J, Boyce K,Cai J,Crosbie N,Dalphin M, Furlong J, Gasparetto M, Goldberg M, Goralczyk EM, HyunB, Jansen K, Kollmann T, Kong M, Leif R, McWeeney S, MoloshokTD,Moore W, Nolan G, Nolan J, Nikolich-Zugich J, Parrish D, Purcell B,Qian Y, Selvaraj B, Smith C, Tchuvatkina O,Wertheimer A, Wilkinson B Wilson C, Wood J, Zigon R; InternationalSociety for Advance­ment of Cytometry Data Standards Task Force,Scheuermann RH, Brinkman RR.(2008) MIFIowCyt: the minimuminformation about a Flow Cytometry Experiment.Cytometry A.73(10):926-30.PMID: 187522824.McNeilLK, Price L, Britten CM, Jaimes M, Maecker H, Odunsi K, Matsuzaki J,Staats JS, Thorpe J, Yuan J, Janetzki S. (2013) A harmonizedapproach to intracellular cytokine staining gating:Results from aninternational multiconsortia proficiency panel conducted by theCancer Immunotherapy Consortium (CIC/CRI).Cytometry A. 83(8):728-38.PM ID: 237884645.ParksDR, Roederer M, Moore WA.(2006) A new "Logicle" displaymethod avoids deceptive effects of logarithmic scaling for lowsignals and compensated data.Cytometry A. 69(6):541-51 .PMID:16604519
<hr/>三、往期热门资源有需要自取哈

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长长的路

图片显示的是Foxp3的表达占比，X周指的的Foxp3，相对应的蓝色框为Foxp3的圈门，圈门里面的就是为Foxp3的表达；Y周指的是CD4的表达。图中A和B是两种不同的处理，图上为CONTROL组，图下为YBG组。

同花顺

流式细胞术不仅高速客观，还具有统计学意义，能够处理复杂样本并同时获取多种参数，最关键的是它性能可靠，可重复性非常好。
今天，小V给大家总结了一波流式细胞实操技巧，轻松解决从「实验设计」到「结果分析」所有问题！

流式细胞“黄金”攻略，从「软件安装」到「结果分析」的全流程干货分享





一
Flowjo 10流式分析软件安装包+教程



二
实操讲解：流式细胞软件FlowJo分析
01.画门与统计
02.概论:自动补偿
03.进阶1: contatenate/downsample/tsne
04.进阶2:聚类flowsom树状图+tsne
05.布尔画门
06.compensation  matters 1218webinar
07.3overlay
08.4Transformation of axes
09.Compensation Part 2
10.FlowJo Compensation


三
流式细胞入门必备教程
1.流式细胞术原理
2.荧光通道流式图3.实验对照设计


四
流式细胞分选前样本制备
01.外周血样本处理
02.贴壁细胞样本处理03.组织样本处理04.细胞冻存和复苏05.细胞染色


五
流式细胞仪分析技术
01.流式细胞仪分析技术：基本概念mp4
02.流式细胞仪分析技术：检测信号之散对光信号.mp4
03.流式细胞仪分析技术：检测信号之荧光信号mp4
04.流式细胞仪分析技术：荧光补偿调节.mp4
05.流式细胞仪分析技术：测量结果示和分析.mp4
06.肿瘤学中的应用：细胞周期的检测.mp4
07.肿瘤学中的应用：细胞凋亡的检测.mp4
08.肿瘤学中的应用：细胞增殖的检测.mp4
09.肿瘤学中的应用：转染效率的检测.mp4


六
必须掌握！流式集训营
01.样本制备很重要
02.严谨藏在对照里
03.如何选择合适的刺激剂
04.如何为你的实验选择合适的固定破膜剂
05.如何获得完整的流式周期实验流程_
06.如何_优美的做流式凋亡实验
07.流式辅助试剂：七大神器的用途
08.Flowjo如何layout出好看的流式图
09.Flowjo分析细胞功能实验数据
10.FlowJo调补偿的一二式


七
全网最全流式细胞分析
01.如何做流式细胞分析？

02.细胞周期是什么？
03.细胞周期实验原理介绍
04.细胞周期参数讲解
05.细胞周期实验方法
06.细胞周期实验操作步骤

你是否也面临着以下问题：

• 1：实验所需的仪器太贵，买不起，借不来，如seq，芯片等；
  
• 2：实验需要大量数据分析，自己不会做，不想学，也不认识会做的人，如seq结果分析等；
  
• 3：实验技术可以学到，但是消耗大量时间，且外包实验成本不高，如组织化学实验；
  
• 4：文章急着要投，但差一个数据，自己实在没时间或实在不想学；
  

别慌，为解决广大一线临床医生发表的难题，超30000三甲医院医生为你力荐的生物医学科研服务机构——小V科研。

我是小V，一个致力于实验设计、课题设计、SCI的科研人员
日常专注科研学术干货分享，有兴趣的朋友可以互相探讨

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