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[分享] ELISA最全操作步骤,看完还不会的尽管找我!(上)

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发表于 2024-9-17 13:28 | 显示全部楼层 |阅读模式

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ELISA试剂盒包含预包被酶标板、检测抗体、链酶亲和素标记的HRP、标准品、标准品稀释液、TMB显色液、终止液、洗液、封板膜、检测缓冲液等10个成分。
实验前,请将试剂盒、样本取出;室温放置半小时,恢复至室温。
第一步:ELISA缓冲液配制 吸取5毫升10x Assay Buffer缓冲液,至50ml离心管,吸取50ml20x洗液至1升量筒,加蒸馏水至1000毫升。
第二步:标准品溶解和稀释 取出标准品,2000rpm 离心2分钟,以便管壁上的粉末集中到管底,根据标签,加入一定的蒸馏水,盖上盖子,涡旋震荡5秒,静置10-30分钟至粉末完全溶解,准备8个1.5毫升的EP管,标注S1至S7和空白,用于标准品对策梯度稀释; 加入150微升标准品稀释液,吸取150微升重溶的标准品,至S1中进行2倍稀释,吹打10次混匀,涡旋震荡5秒,从S1管中吸取150微升液体,至S2管中,吹打混匀,继续以上步骤梯度稀释至S2至S7;
第三步:稀释检测抗体 检测抗体为100x浓缩液,所以吸取50微升检测抗体,至5毫升1x Assay Buffer 震荡混匀备用;
第四步:加样 取出已恢复至室温的酶标板,加入300微升洗液,以洗去包被抗体保护剂,使包被抗体处于最佳活性状态,静置浸泡30秒。洗板结束后,立即使用酶标板,不要让酶标板干燥。
排版布局H1、H2孔为空白孔,A1、A1至G1、G2为标准曲线的S1至S7孔,每孔加入50微升的Assay Buffer,根据排版,每孔加入50微升标准品和样本,加样时,垂直悬空加入液体,加完后枪头轻轻碰液面(建议标准品,样本都做复孔),最后每孔加入50微升检测抗体,加完后用封板膜小心封好酶标板,为让抗原抗体充分接触。 将酶标板置于震荡仪上,室温300r\min 孵育2小时。

原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/607934175
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