实验室36种微生物培养基配制方法

营养师

常用的微生物培养基及配制方法


1.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）
牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，pH7.4～7.6。
2.高氏1号培养基(用于放线菌培养)
可溶性淀粉20g，KNO₃ 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4•3H2O 0.5g，MgSO4•7H2O0.5g，FeSO4•7H2O0.01g•水1000mL•pH7.4～7.6。配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌）
K2HPO 41g，MgSO4•7H2O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，1/3000孟加拉红水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃湿热灭菌30min。待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。
4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养)
马铃薯(去皮) 200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下：
将马铃署去皮，切成约2cm²的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖，再补足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。
5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养)
蔗糖 30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4•7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4•7H2O 0.1g，水1000mL，pH7.0～7.2。


6.Hayflik培养基(用于支原体培养)
牛心消化液(或浸出液) 1000mL，蛋白胨 10g，NaCl 5g，琼脂 15g，pH7.8～8.0，分装每瓶 70mL，121℃湿热灭菌15min，待冷却至80℃左右，每70mL中加入马血清20mL，25%鲜酵母浸出液 10mL，15醋酸铊水溶液2.5mL，青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上) 0.5mL，以上混合后倾注平板。
*注意：醋酸铊是极毒的药品，需特别注意安全操作。
7.麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基)
葡萄糖0.1g，KCl 0.18g，酵母膏0.25g，醋酸钠0.82g，琼脂l.5g，蒸馏水100mL。溶解后分装试管，1l5℃湿热灭菌15min。
8.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于V.P.反应和甲基红试验)
蛋白胨 0.5g，葡萄糖 0.5g，K2HPO4 0.2g，水 100mL，pH 7.2，1l5℃湿热灭菌20min。
9.蛋白胨水培养基(用于吲哚试验)
蛋白胨 10g，NaCl 5g，水 1000mL，pH7.2～7.4，121℃湿热灭菌20min。
10.糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验)
蛋白胨 0.2g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.02g，水 100mL，溴麝香草酚蓝(1%水溶液) 0.3mL，糖类 1g。分别称取蛋白胨和NaCl溶于热水中，调pH至7.4，再加入溴麝香草酚蓝(先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)，加入糖类，分装试管，装量4～5cm高，并倒放入一杜氏小管(管口向下，管内充满培养液)。115℃湿热灭菌20min。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等(后两种糖的用量常加大为1.5%)。


11.RCM培养基(强化梭菌培养基)、(用于厌氧菌培养)
酵母膏 3g，牛肉膏 10g，蛋白胨10g，可溶性淀粉1 g，葡萄糖5 g, 半胱氨酸盐酸盐 0.5g，NaCl 3g，NaAc 3g，水l000mL，pH8.5，刃天青3mg/L，l21℃湿热灭菌30min。
12.TYA培养基(用于厌氧菌培养)
葡萄糖 40g，牛肉膏 2g，酵母膏 2g，胰蛋白胨(bacto-typetone) 6g，醋酸铵3g，KH2PO4 0.5g，MgSO4•7H2O0.2g，FeSO4•7H2O0.01g，水1000mL， pH6.5，121℃湿热灭菌30min。
13.玉米醪培养基(用于厌氧菌培养)
玉米粉 65g，自来水1000mL，混匀，煮10min成糊状，自然pH，121℃湿热灭菌30min。
14.中性红培养基(用于厌氧菌培养)
葡萄糖 40g，胰蛋白胨 6g，酵母膏 2g，牛肉膏 2g，醋酸铵 3g，KH2PO4 5g，中性红 0.2g，MgSO4•7H₂O 0.2g，FeSO4•7H₂O 0.01g，水1000mL，pH6.2，121℃湿热灭菌30min。
15.CaCO3明胶麦芽汁培养基(用于厌氧菌培养)
麦芽汁(6波美) 1000mL，水 1000mL，CaCO3 10g，明胶 10g，pH6.8，121℃湿热灭菌30min。
16.BCG牛乳培养基(用于乳酸发酵)
(A)溶液：脱脂乳粉 100g，水 500mL，加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液 1mL，80℃灭菌20min。
(B)溶液：酵母膏 10g，水 500mL，琼脂 20g，pH6.8，121℃湿热灭菌20min。以无菌操作趁热将(A)、(B)溶液混合均匀后倒平板。
17.乳酸菌培养基(用于乳酸发酵)
牛肉膏 5g，酵母膏 5g，蛋白胨 10g，葡萄糖 10g，乳糖 5g，NaCl 5g，水 1000mL，pH6.8，121℃湿热灭菌20min。

18.酒精发酵培养基(用于酒精发酵)
蔗糖 10g，MgSO4•7H2O 0.5g，NH4NO3 0.5g，20%豆芽汁 2mL，KH2PO4 0.5g，水 100mL，自然pH。

19.柯索夫培养基(用于钩端螺旋体培养)
优质蛋白胨 0.4 g，NaCl 0.7g，KCl 0.02g，NaHCO3 0.01g，CaCl 0.02g，KH2PO4 0.09g，NaH2PO4 0.48g，蒸馏水500mL，无菌兔血清40mL。
制法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调pH至7.2，121℃湿热灭菌20min，待冷却后，加入无菌兔血清，制成8%血清溶液，然后分装试管（5～10mL/管），56℃水浴灭活1h后备用。
20.豆芽汁培养基
黄豆芽 500g，加水 1000mL，煮沸 1h，过滤后补足水分，121℃湿热灭菌后存放备用，此即为50%的豆芽汁；
用于细菌培养：10%豆芽汁 200mL，葡萄糖(或蔗糖) 50g，水 800mL，pH7.2～7.4。
用于霉菌或酵母菌培养：10%豆芽汁 200mL，糖 50g，水 800mL，自然pH。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。
21.LB(Luria—Bertani)培养基(细菌培养，常在分子生物学中应用)
双蒸馏水 950mL，胰蛋白胨 10g，NaCl 10g，酵母提取物(bacto- yeast extract) 5g，用lmol/L NaOH (约l mL) 调节pH值至7.0，加双蒸馏水至总体积为1L，121℃湿热灭菌30min。
含氨苄青霉素LB培养基：待LB培养基灭菌后冷至50℃左右加入抗生素，至终浓度为80～100mg/L。
22.复红亚硫酸钠培养基(远藤氏培养基)、(用于水体中大肠菌群测定)
蛋白胨 10g，牛肉浸膏 5g，酵母浸膏 5g，琼脂 20g，乳糖 10g，K2HPO4 0.5g，无水亚硫酸钠5g，5%碱性复红乙醇溶液20mL，蒸馏水1000mL。
制作过程：先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到900mL水中，加热溶解，再加入K2PO4，溶解后补充水至1000mL，调pH至7.2～7.4。随后加入乳糖，混匀溶解后，于115℃湿热灭菌20min。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中，用少许无菌水使其溶解，在水浴中煮沸10min后，立即滴加于20mL 5%碱性复红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中，混匀后立即倒平板，待凝固后存放冰箱备用，若颜色由淡红变为深红，则不能再用。
23.乳糖蛋白胨半固体培养基(用于水体中大肠菌群测定)
蛋白胨 10g，牛肉浸膏 5g，酵母膏 5g，乳糖 10g，琼脂 5g，蒸馏水 1000mL，pH7.2～7.4，分装试管(l0mL/管)，115℃湿热灭菌20min。
24.乳糖蛋白胨培养液(用于多管发酵法检测水体中大肠菌群)
蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖 5g，NaCl 5g，蒸馏水 1000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL。调pH至7.2，分装试管(10mL/管)，并放入倒置杜氏小管，15℃湿热灭菌20min。
25.三倍浓乳糖蛋白胨培养液(用于水体中大肠菌群测定)
将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大3倍加入到 1000mL水中，制法同上，分装于放有倒置杜氏小管的试管中，每管5mL，15℃湿热灭菌 20min。
26.伊红美蓝培养基(EMB培养基)(用于水体中大肠菌群测定和细菌转导)
蛋白胨 10g，乳糖 10g，K2HPO4 2g，琼脂 25g，2%/伊红Y(曙红)水溶液20mL，0.5%美蓝(亚甲蓝)水溶液 3mL，pH7.4。
制作过程：先将蛋白胨、乳糖、K2HPO4和琼脂混匀，加热溶解后，调pH至7.4，15℃湿热灭菌20min，然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液，充分混匀，防止产生气泡。待培养基冷却到50℃左右倒平皿。如培养基太热会产生过多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖，其余成分不变。


27.加倍肉汤培养基(用于细菌转导)
牛肉膏 6g，蛋白胨 20g，NaCl 10g，水 1000mL，pH7.4～7.6。
28.半固体素琼脂(用于细菌转导)琼脂 1g，水 100mL，121℃湿热灭菌30min。
29.豆饼斜面培养基(用于产蛋白酶霉菌菌株筛选)
豆饼 100g 加水5～6倍，煮出滤汁 100mL，汁内加入KH2PO4 0.1%，MgSO4 0.05%，(NH4)2SO4  0.05%，可溶性淀粉2%，pH6，琼脂2%～2.5%。  
30.酪素培养基(用32.YEPD培养基(用于酵母原生质体融合)
酵母粉 10g，蛋白胨 20g，葡萄糖 20g，蒸馏水 1000mL，pH6.0，115℃湿热灭菌20min。
33.YEPD高渗培养基(用于酵母原生质体融合)
在YEPD培养基中加入0.6 mol/L 的 NaCL，3%琼脂。
34.YNB基本培养基(用于酵母原生质体融合)
0.67%酵母氮碱基(YNB, 不含氨基酸，Difco)，2%葡萄糖，3%琼脂，pH6.2。
另一配方为：葡萄糖10g(NH4)2SO4 1g，K2HPO4 0.125g，KHPO4 0.875g，KI 0.0001g，MgSO4•7H2O 0.5g，CaCl2•2H2O 0.1g，NaCl 0.1g，维量元素母液 1mL，维生素母液 1mL(母液均按常规配制)，水1000mL，pH5.8～6.0。
35.YNB高渗基本培养基(用于原生质体融合)
在YNB基本培养基中加入0.6 mol/L NaCl。
36.酚红半固体柱状培养基(用于检查氧与菌生长的关系)
蛋白胨 1g，葡萄糖 10g, 玉米浆 10g，琼脂 7g，水 1000mL，pH7.2。在调好pH后，加入1.6%酚红溶液数滴，至培养基变为深红色，分装于大试管中，装量约为试管高度的1/2，15℃灭菌20min。细菌在此培养基中利用葡萄糖生长产酸，使酚红从红色变成黄色，在不同部位生长的细菌，可使培养基的相应部位颜色改变,但注意培养时间太长，酸可扩散以致不能正确判断结果。
以上各种培养基均可配制成固体或半固体状态，只需改变琼脂用量即可，前者为1.5%～2.0%，后者为0.3%～0.8%。

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