立即注册找回密码

QQ登录

只需一步,快速开始

微信登录

微信扫一扫,快速登录

手机动态码快速登录

手机号快速注册登录

搜索

图文播报

查看: 379|回复: 0

干货分享 | qRT-PCR实验全流程(上)

[复制链接]
发表于 2024-8-31 13:04 | 显示全部楼层 |阅读模式

登陆有奖并可浏览互动!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有账号?立即注册 微信登录 手机动态码快速登录

×
作者:知乎
用核酸清洁剂擦拭移液枪和台面,确保所有试剂、耗材处理彻底,保证无酶环境。
一、细胞中RNA提取
1.1裂解:添加Trizol破坏细胞释放RNA
每5-10x106个细胞1mL trizol,置于冰盒上。
1.2萃取:添加氯仿使混合物分组
按氯仿:trizol=1:5的比例样品中加入氯仿(0.2ml),剧烈振荡15sec,室温放置3-5min
低温离心机12000rpm,离心15min。离心后溶液分层,RNA存在于层中。
1.3沉淀:添加异丙醇,沉淀核酸
取上清于离心管中,加入等体积的异丙醇,轻柔翻转颠倒3-5次混匀,静置10-20min。
低温离心12000rpm,离心10min
1.4洗涤:弃去上清
将离心后上清丢弃,加入75%乙醇,轻摇,洗涤沉淀,4℃9000rpm,离心5min。
1.5溶解:留沉淀风干
弃去上清,风干3-5min。加入25μL无酶水。
RNA质量评价
RNA总量、RNA纯度、RNA完整性
浓度:
RNA样品浓度=A260x40稀释倍数
RNA浓度<200ng/μL不适合进行后续实验
纯度:
OD260/OD280=1.9~2.1,代表高纯度的RNA
OD260/OD280<1.9,有蛋白质残留
OD260/OD280>2.1,RNA有部分降解
将RNA样品添加至溶液槽中,紫外分光光度计检测 260nm和280nm波长处的吸光值,通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性。
好啦,由于篇幅原因,今天就先讲到这里啦!明天我们继续学习!
点赞收藏+关注,让你试验操作不迷路~

原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/620797090
楼主热帖
回复

使用道具 举报

发表回复

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册 微信登录 手机动态码快速登录

本版积分规则

关闭

官方推荐 上一条 /3 下一条

快速回复 返回列表 客服中心 搜索 官方QQ群 洽谈合作
快速回复返回顶部 返回列表