Western blot | 条带问题千千万，旧的不去新的又来

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蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

蛋白实验虽然简单，但是条带容易出现的问题极多，下面来分享一下不同条带的原因和解决办法吧。

出现不均匀的白色斑点的原因

• 转膜时有气泡
• 膜上抗体分布不均匀
  
  

解决办法

• 转膜前小心去除气泡
• 抗体孵育时保持摇动
  
  

条带的“微笑”效应的原因

• 迁移过快
• 电泳时温度过高
  
  

解决办法

• 优化电泳条件
• 降低电泳温度，在冰上操作
  
  

条带分布不均匀的原因

• 可能和抗体有关
• 可能孵育时振荡不均匀
• 抗体和封闭液不结合
  
  

解决办法

• 更换二抗
• 确保孵育过程中膜完全浸没在抗体中，孵育时确保摇晃均匀
• 尝试更换封闭液
  
  

条带问题千千万，以上内容只涉及小部分原因和解决办法，还有很多其他因素。总之，有时候步骤正确可能是操作手法的问题，建议大家做实验的时候严谨一点哦。