层析纸条堵塞的问题

t123 · 发表于 2016-2-23 14:31

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在做实验时，采用100-200nm的荧光微球做标记物，结果大部分标记物堵塞在NC膜下端，希望在这方面得到大家的指导。
百度云附件：层析堵塞问题.jpg

涩涩的茶 · 发表于 2016-2-24 21:32

微球标记物发生凝集了，如果标记过程没问题的话，尽量提高反应体系的PH。

t123 · 发表于 2016-2-25 08:57

恩。谢谢指导。
标记物的凝集是不是无法避免的？尝试了多种标记方法后会改善一些。提到的反应体系的PH是一个问题点。以前还没有留意过。我试验一下。

SPHERE-MFCIS · 发表于 2018-1-12 16:38

微球聚集的概率居多，但是文件没了，看不到图，根据经验，你应该是标记PH低了一些，另外偶联后超声步骤做的不够好造成的，两方面去优化，应该是可以改善的

Egoist · 发表于 2018-2-25 10:57

楼主，堵塞问题现在解决了没？分享下解决办法

SPHERE-MFCIS · 发表于 2018-6-28 09:52

Egoist 发表于 2018-2-25
楼主，堵塞问题现在解决了没？分享下解决办法

看我的回答，可以用此方法去尝试，应该是可以改善的

ZWB · 发表于 2019-8-12 22:33

涩涩的茶发表于 2016-2-24
微球标记物发生凝集了，如果标记过程没问题的话，尽量提高反应体系的PH。

求大神指导如果反应体系PH值已经足够高了，但还是会微球还是会堵膜。尝试过不同的标记方案，筛选过各种标记抗体浓度和PH值，但是就会堵膜。
用的微球是300nm 的

涩涩的茶 · 发表于 2019-8-17 15:31

可以试试100nm或者200nm的微球

SPHERE-MFCIS · 发表于 2021-3-4 09:13

可以尝试小一些的微球，另外可以更换大孔径的nc膜，不过大部分情况都是标记物这方面做得不太好

友友 · 发表于 2021-3-4 12:15

ZWB 发表于 2019-8-12
求大神指导如果反应体系PH值已经足够高了，但还是会微球还是会堵膜。尝试过不同的标记方案，筛选过各 ...

可以考虑降低微球固含量或标记抗体后封闭优化，进一步改善

wzy123sss · 发表于 2021-3-5 12:01

降低标记离子强度，尝试PH6.0-9.0区间，降低标记抗体量都是可以试试的。

SPHERE-MFCIS · 发表于 2021-3-9 22:22

多优化标记过程，超声步骤一定要注意，期待能越做越好😄😄

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