磁珠试剂瓶放置于冰箱2-8℃保存时,要注意试剂瓶不能贴壁,避免冰箱启用除霜功能时造成悬液结冰失效。磁珠试剂瓶宜置于冰箱中部,避免靠壁。 b.避免长时间室温放置 长时间常温放置也会影响磁珠的回收性能,因此磁珠用完后请及时放回4℃,特别是一些免疫蛋白或链霉亲和素修饰的磁珠。 庄主推荐:液相杂交捕获 c.避光保存 一些磁珠需要避光保存,如修饰有荧光基团的磁珠。 d.避紫外线 室温平衡时应避免阳光直射,以防紫外线损伤;使用中也应避免紫外光照。 推荐冷链2-8℃运输。小包装产品用泡沫盒子加冰袋也能短时间运输,但冰袋和磁珠试剂瓶/管之间需用传热性能低的泡沫或塑料隔开,避免装磁珠的试剂瓶/管直接接触冰袋。 2、磁珠冷冻后会发生什么? a.磁珠团聚易沉降 冷冻、干燥和离心都会引起磁珠团聚而无法再分散,导至磁珠性能失效。 b.结构破坏,性能失效 过低的温度(如-20℃)会破坏磁珠结构及表面修饰,影响磁珠抓取效率。 ⅰ.纯化磁珠DNA回收效率低,回收特异性下降,回收得到的DNA杂质多。 ⅱ.oligdt磁珠失去效能,不再特异性抓取mRNA,建库得到的文库为总RNA文库。 庄主推荐:"oligodT"和mRNA ⅲ.链霉亲和素磁珠失去效能,杂交捕获洗脱得到的文库捕获效率及低,文库浓度偏高。 3、免疫磁珠在使用过程中出现聚集或挂壁情况的原因? a.正常情况 免疫/链霉亲和素磁珠具有带负电荷的表面,磁珠在低pH的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象,不影响磁珠的正常使用。 b.非正常情况 ⅰ.可能是由于β-巯基乙醇、DTT、pH差值大等因素,影响磁珠的均一性,使得磁珠粘稠,导至聚集成块或出现挂壁的现象。 ⅰ.在Binding buffer和Elution buffer中添加终浓度为0.1%(v/v)的非离子型去垢剂(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。 庄主推荐:“ 核酸提取实验 ” 中的那些试剂 ! ⅱ.经过低pH操作的磁珠可以用结合缓冲液洗涤至中性,然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Tris buffer(pH7.5)振荡重悬磁珠。 ⅱ.磁珠pH值异常 磁珠的pH值可能会因为受到酸碱性物质的影响而发生变化,导至结块。在使用磁珠时,要注意保持合适的pH值。 ⅲ.离心过久 在洗涤步骤中,磁珠离心时间过久,可能导至磁珠颗粒间的结合力增强,形成结块。磁珠在磁场中放置太久也会使磁珠牢固的结合在一起。 图片来源:12孔磁力架(1.5/2.0ml)--性能参数,报价/价格,图片_生物器材网 4、如何解决磁珠易粘附管壁的现象? 粘性可能是由于磁珠之间或磁珠与管壁之间的静电相互作用造成的。通常,建议使用低吸附率的耗材进行磁珠操作。 庄主推荐:“离心管”中的材料学 另外,建议在进行实验之前,用诸如Tween 20去污剂的非离子去污剂洗涤磁珠。这种处理可以降低磁珠的静电电势。 通常只需将Tween 20去污剂加入到磁珠中,最终浓度可达到0.1%,然后在不含去污剂的缓冲液中重悬并洗涤磁珠,就可以减少或消除这个问题。可能需要在Tween 20溶液中孵育,例如在室温下滚动孵育 5-10分钟。 在缓冲液中添加0.01%~0.1%(v/v)的非离子型去垢剂(如NP-40、Tween-20或TritonX-100)也可以有效降低磁珠对耗材的粘附。 5、磁珠可以吸附ssDNA和RNA吗? 不管双链DNA、单链DNA,还是RNA,都可以在溶液中解离出带负电的磷酸基团,因此都可以用磁珠进行纯化回收,但单链DNA和RNA都没办法进行片段大小筛选。 庄主推荐:" RNA "和" DNA "的那点故事 参考资料 [1]磁珠的保存法,磁珠的保存条件。磁珠使用注意事项。- 知乎中科科优 [2]5min了解DNA磁珠的前世今生(含结果分析及FAQ解读)-翌圣生物 [3]磁珠在保存、运输及使用前的建议-博兰鹰 [4]磁珠常见问题及对策-化工仪器网-手机版 [5]磁珠回收DNA和片段筛选 - 知乎秉聿随记 [6]干货分享|磁珠常见问题与解决方案-翌圣生物 [7]Dynabeads磁珠核酸纯化支持——问题排查 | Thermo Fisher Scientific - CN [8]磁珠法核酸提取过程中的6种常见误区-分析测试百科网 |