从诺贝尔奖到临床实践：觅瑞miRNA技术的产业化突破

2024-10-13 00:10| 编辑: 小桔灯网| 查看: 660| 评论: 0|来源: IVD自习室

摘要: 前言2024年10月7日，诺贝尔生理学或医学奖授予了维克托·安布罗斯（Victor Ambros）和加里·鲁夫昆（Gary Ruvkun），以表彰他们在“发现microRNA（miRNA）及其在转录后基因调控中的作用”方面的开创性贡献。这一发现 ...

前言

2024年10月7日，诺贝尔生理学或医学奖授予了维克托·安布罗斯（Victor Ambros）和加里·鲁夫昆（Gary Ruvkun），以表彰他们在“发现microRNA（miRNA）及其在转录后基因调控中的作用”方面的开创性贡献。这一发现不仅揭示了基因调控的新机制，还为疾病的诊断和治疗带来了革命性的变化。今天，我们就来聊聊miRNA在疾病诊断中的应用，特别是觅瑞的胃癌早诊黑科技——GASTROClear™。

miRNA的重要性

miRNA是一类长约18-25个核苷酸的内源性非编码RNA分子，是基因调控网络中的重要组成部分。它们在细胞的发育、增殖、分化以及代谢、内环境稳态和宿主-病毒相互作用等重要生理过程中发挥着关键作用。没有miRNA，细胞和组织就无法正常发育。miRNA的异常调节会导至多种疾病，如癌症、心血管疾病、代谢疾病、神经退行性疾病及传染病等。

觅瑞的miRNA产业化之路

觅瑞是全球为数不多的已获得分子癌症筛查行业IVD产品监管批准的公司之一，也是全球范围内首家且唯一一家获得分子胃癌筛查IVD产品监管批准的公司。觅瑞于2024年4月30日再次更新了港交所主板招股说明书，显示其拥有一款核心产品（GASTROClear™）、两种其他商业化产品（LungClear™及Fortitude™）以及六种检测miRNA的处于临床前阶段的候选产品。

GASTROClear™：全球首个获批的血液微小核酸胃癌早诊试剂盒

技术背景

GASTROClear™是全球首个获批的血液微小核酸胃癌早诊试剂盒产品，基于qPCR检测平台，对人体外周血(血清样本）中12种与胃癌相关的miRNA标志物组合进行定量分析，最终通过自主研发的算法模型，计算得出每位受检者的癌症风险评分。其miRNA检测基于专利性的ID3EAL™技术平台，可在血液、尿液甚至泪液等生物体液样本中进行超高灵敏度及稳定性的miRNA检测。

ID3EAL™技术平台

ID3EAL™采用的是3引物半巢式染料法RT-qPCR法来检测miRNA，具体步骤如下。

ID3EAL™技术原理

逆转录（cDNA生成）

每个miRNA靶标设计一条特异性茎环逆转录引物（若相同可共用，用量需调整），茎环结构改善了引物与目标miRNA的杂交，提高了分析灵敏度和特异性。
可在茎环逆转录引物包含一个dUTP，产生的cDNA可以用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG）处理，以去除含有dU的cDNA片段，使得即使是高度同源的miRNA也能够被有效区分开来，从而提高方法的特异性。（胃癌产品中未应用）

qPCR扩增

每个miRNA靶标通过一个序列特异性的正向PCR引物和一个半巢式序列特异性的反向PCR引物进行扩增。
这种组合能够增强对高度同源的家族成员的广泛区分能力，能够区分单个碱基的差异。

GASTROClear™试剂盒检测程序

核酸提取

GASTROClear™试剂盒包含核酸提取组分，采用专利性核酸提取技术，可提取浓度较低的miRNA。
RNA提取是通过将血清样本与苯酚/鸟苷酸基裂解液结合，并采用硅胶膜基纯化总RNA来完成的。
上层水相被提取出来，并加入乙醇以提供适合RNA分子（包括miRNA）结合的条件。样品随后被应用于离心柱，总RNA结合到膜上。苯酚和其他污染物被有效洗去。最后，RNA在少量的洗脱液中被洗脱出来。

逆转录

GASTROClear™先通过在1孔中12重逆转录体系将12种miRNA全部逆转录，设定多个逆转录温度，保证多种逆转录引物能达到一致的逆转录效率。
仅Veriti Dx 96-well Thermocycler Instrument (Applied Biosystems)可用于逆转录。
逆转录程序

qPCR

随后将逆转录产物与酶、buffer混合物分为24份，每孔对1种miRNA进行定量检测，每种miRNA重复2孔。（引物和染料似乎冻干在384孔板中。）
qPCR扩增必须在QuantStudio Dx 384W Real-Time PCR上进行，扩增程序已内置。
qPCR排板

数据分析

扩增曲线检查：每条扩增曲线都要进行检查，要求平台期的∆Rn在1.5-2.8之间，阴性对照的CT＞30。若∆Rn小于1.5，该孔被判无效。
正常扩增曲线结果
风险评分生成：风险评分生产软件需导入qPCR仪生成的raw data，根据觅瑞的胃癌预测模型，自动给出风险评分。

结果解读

GASTROClear™是一种体外诊断胃癌的辅助检测手段，用于检测人血清中与胃肿瘤相关的miRNA生物标志物。
GASTROClear™并非用于替代胃镜检查；它应与胃镜检查和其他检测方法结合使用，符合公认的临床指南。
只有符合特定标准的患者才会使用GASTROClear™进行检测。检测结果可能指示胃癌的存在，患者随后需要进行胃镜检查和活检。
GASTROClear™风险分数解读

适用人群

该检测适用于40岁或以上、有以下任一风险因素的成人（无论性别）：

家族胃癌病史
幽门螺杆菌（H. Pylori）感染史
既往有胃淋巴瘤或胃息肉病史
长期胃炎（慢性胃炎）
饮食中含有大量油炸食品、熏制食品、咸鱼、加工肉类和腌制食品
饮食中含有亚硝酸盐和硝酸盐物质，这些物质常见于腌制肉类
饮食中水果和蔬菜摄入量低
吸烟

未来展望

觅瑞的miRNA产业化之路不仅为癌症及其他疾病的早期检测提供了新的解决方案，还为miRNA在临床应用中的进一步研究和发展奠定了基础。随着技术的不断进步和市场的逐步拓展，我们有理由相信，miRNA将在未来的医疗领域发挥更大的作用。

结语

后续我们将继续关注miRNA的产业化进展及相关产品的开发，希望能与大家一起学习和探讨miRNA的技术和应用，共同期待这一领域的美好未来。

参考

觅瑞官网、招股说明书与产品说明书

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