4个获批微卫星不稳定（MSI）PCR试剂盒

PCR+毛细管电泳法是MSI检测的金标准，具体做法是：

首先分别提取肿瘤样本和对照样本（正常组织或者血液）的DNA，然后使用试剂盒进行PCR扩增，并采用基因分析仪进行DNA片段分析，比较肿瘤组织和对照样本中各微卫星位点的电泳图峰型和数目，判断肿瘤组织相应位点的不稳定状态。

如下Promega MSI Panel电泳图示例，癌症组织样本每个MSI位点有两个峰（如果十分稳定的位点则只有一个峰)，下面方框内数字为每个峰对应长度值，其中一个峰应和右侧的对照样本一致，主要通过这两个峰的长度差别来判断位点是否稳定。

MSI版本主要有以下三个：

第一个：1997年美国国家癌症研究所（NCI）提出的“2B3D” Panel，该Panel包括２个单核苷酸位点（BAT-25和BAT-26）和３个双核苷酸位点 （D2S123、D5S346和D17S250）；

第二个：2002年，美国NCI对MSI的检测进行修订和补充，推荐含有５个单核苷酸位点（BAT25 , BAT26 , NR21，NR22 , NR24）构成的Pentaplex Panel；

第三个：2006年Promega公司发布的新体系。将Pentaplex Panel中的NR-22替换为MONO-27，包括５个单核苷酸位点（BAT25 , BAT26 , NR21，MONO-27, NR24）和２个对照位点（PentaC和PentaD）。

其中国内外权威指南和专家共识推荐MSI检测方法主要是2B3D Panel和Promega Panel。

至于判断标准都是有２个或２个以上的微卫星位点不稳定为MSI-H，一个为MSI-L，都稳定的话为MSS。

至于获批的试剂盒：从2021年1月桐树生物的首个MSI试剂盒获批，至今已有4个试剂盒获批，汇总如下：

检测的位点与上述三个Panel的位点整体一致：

桐树生物的MSI试剂盒为标准的2B3D Panel；阅微基因和鑫诺基因试剂盒靶点一致，都为Pentaplex和Promega的位点合集；艾德生物的试剂盒则在Promega Panel的基础上将NR-21替换为了新的靶点CAT-25。

这些位点的序列信息如下：

检测时，一般同时也会检测质控位点，主要用于检测样本是否配对：

Penta D、Penta E 以及 Penta C 位点都是五核苷酸重复序列（AAAGA，AAAAG），这些位点具有较高的多态性，广泛应用于法医分析、亲子鉴定检测中。

Amelogenin (Amel) 基因位点主要用于性别鉴定。该基因在X和Y染色体上均有存在，但X和Y染色体上的Amelogenin基因有不同的长度差异，利用这一点可以区分样本的性别。

获批用途：

前三个获批试剂盒：桐树生物/阅微基因/鑫诺生物都是辅助诊断试剂盒，三者获批用途如出一辙，都获批只能用于结直肠癌患者FFPE样本的检测。

艾德生物的试剂盒则获批能用于所有实体瘤患者的FFPE样本的检测，同时开辟了伴随诊断（百济神州的替雷利珠单抗）的先河，高了两个level。

另外NMPA审评中心公布了艾德生物MSI试剂盒的审评报告，关键几点：

艾德生物的MSI试剂盒检测5个目标MSI位点+两个对照Penta位点

检测限LOD：

检测阈值：使用了920个泛癌种实体瘤临床样本确定阳性判断值，阈值为3bp

临床一致性验证：纳入了1000+跨多个癌种的样本进行一致性评估

伴随诊断临床实验：