免疫层析试剂开发心得

笔者从事免疫层析诊断试剂的一线研发工作多年，以自身经验来看，一款试剂盒的成功研发有赖于以下三个因素：优异的抗体性能、完善的标记工艺和稳定的相关配方。简要讨论如下：

【1】优异的抗体性能

按相同的标记方法和测试方法，实验过程中的条件基本保持一致的情况下，同时对不同原料厂家的抗体进行测试，其结果表现为信号的高低差异、高浓度的区分度差异和重复性测试的CV差异。这些差异可以导至试剂盒成品性能和稳定性的差异，直接影响终产品性能。

【2】完善的标记工艺

对免疫层析方法学而言，标记结果的好坏直接影响到区分度的好坏和非特异性的高低。为了提高区分度、降低非特异性，优化完善的标记工艺是发挥抗体性能的重要因素。

【3】稳定的相关配方

主要包括结合垫的处理配方、样本稀释液配方和喷垫溶液配方。在配方中使用的糖类及表面活性剂的比例具有重要的作用，这是保持试剂盒测试重复性CV和稳定性的重要条件。除此之外，还包括选择合适孔径的NC膜、不同结合的垫子及测试全血过程中使用性能优越的滤血膜和抗红细胞抗体RBC，都是试剂盒保持优秀性能的重要保证。

基于上述的分析，我们清楚地认识到试剂盒研发成功的影响因素有很多，但优异的抗体原料性能必须放在首要位置，以脓毒症标志物HBP为例，笔者对多个不同厂家的抗体原料进行了对比测试，在测试质控品或者重组抗原条件下，各家的原料表现差异不大，但是在测试血样过程中，就会出现高浓度区分度不够、重复性CV不稳定以及非特异性较高的现象。迄今，笔者测试过的驰略生物的HBP配对单抗，相较于其它厂家而言，无论在质控品和血样检测中，都表现出更为优异的性能。比如，灵敏度可达5ng/ml，重复性10%左右；线性范围可达300ng/ml；与J司试剂的临床结果比对具有较高的相关性，R²>0.98。