别被忽悠了！了解这些，你就知道该怎么选细胞计数仪了！（上篇） ...

市场上现在有诸多品牌的细胞计数仪，每一家都在“王婆卖瓜”说自己的产品好。细胞计数仪虽然是常规的科研仪器，毕竟还是光机电综合的设备，生命科学与医学的小伙伴一般都不具备相关专业背景，什么分辨率、数值孔径、相机、算法啥的，让人眼花缭乱，再加上些营销的包装就更让人云里雾里不知如何选择了。

细胞计数仪从原理上可以分为库尔特原理和显微成像原理等。在这里我们主要关注显微成像原理的细胞计数仪。我们来看一下选择细胞计数仪都需要关注些什么？

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首先要明确样本与实验的具体需求

1、样本类型

虽然叫细胞计数仪，但不止可以计数细胞，有些计数仪还可以用于酵母菌、藻类的计数。由于酵母菌、藻类的形态与细胞还是有比较大的差异，尤其是藻类，更是形态各异。如果没有明确标明，用于酵母菌、藻类等的计数可能并不一定能获得较好的效果。

对于细胞计数而言，也要考虑细胞的尺寸与形态。要根据细胞的尺寸选择适合倍数的物镜，这在后面还会详细介绍。有文章介绍说淋巴细胞、PBMC等使用荧光计数仪，并非明场的不能用于这些细胞的计数，要选择具有较高放大倍数物镜的计数仪才能满足计数的需求。当然，具有高倍数物镜的荧光款还可以做更多的分析。

另外，通常而言，计数仪针对的基本都是圆形的细胞，如果没有特殊注明，往往对于其他形态的细胞的计数效果不佳。以往有人推荐在原代细胞计数使用荧光款计数仪，最主要的原因是原代培养细胞种类复杂，形态多样，单一的明场不见得获得较好的效果。

2、样本量大小与计数频率

计数仪与样本量大小与计数频率相关的是计数板上的样本数量以及自动化程度。如果样本量大或计数频率高，那就需要考虑计数板上样本数量多，且自动化程度高的计数仪。

自动化程度与以下几方面相关。

一个是手动还是自动进行细胞计数。手动的细胞计数板是两个样本孔的，加完样本计数一个孔之后要手动将计数板拔出来，换个方向再插到仪器中进行另一个样本计数，效率很低。

自动计数，则是不管计数板上有几个样本孔，都可以自动进行计数。样本量多的时候，时间的节省就非常明显。猛博士以为，比较合理的样本孔数量是6或者是8。三重复是满足统计意义的需求，6刚好可以有两组样本。8是对应排枪或培养板的，适合高通量操作。

当然，还有一个重要的指标就是单样本计数的时间。这个不仅仅跟自动化程度有关，还跟系统的光学效率与算法及计算机硬件的配置相关。小伙伴倒不需要了解那么多，重点关注一下宣称的计数时间与实际表现是否一致。如果一致，时间短的显然效率高。

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还有个与效率有关系的自动化就是上样的自动化。这往往是样本通量非常高的时候选择才更有价值。

3、实验类型

不同的实验类型对计数要求的准确性是不同的。比如常规的细胞传代、冻存等的计数不需要那么准确，明场计数仪一般就可以满足需求了。

如果后续还有其他的实验，比如用于细胞治疗、基因编辑、生物制药等，那就要选择性能更好的计数仪。具体需要考虑的因素后面介绍。

4、法规要求

对于药企，如果所做的实验是药物临床研究或临床前研究的一部分，那除了性能之外，还需要考虑是否符合FDA的21CFR Part 11标准，主要是要满足对实验数据电子记录的安全性要求、对工作权属明确以及追踪的要求，与电子签名。通常情况，还需要提供计数仪的3Q认证。

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细胞计数仪需要关注哪些要点

1、准确度、精确度与重复性

准确识别细胞是一切的基础，这跟系统的很多因素有关。咱们也别光听厂家的宣传，要比对一下拍摄的原图和标注图，看一下这里面有没有错误的识别，有没有是细胞但没有识别上的，还有没有不是细胞被识别成细胞的。用稍微复杂点的样本进行比对，看看结果，往往能判断计数仪对细胞的识别是否准确。

另外，细胞计数器的准确度和精确度与观测到的体积成正比。一般来说，细胞计数板的样品孔的高度是固定的，要增加观测到的体积，只能靠增加成像面积。

自动化的计数仪才具备移动计数板，拍摄多个视野，增加成像面积以获得更精确的细胞计数结果。手动的则不具备这样的功能。

重复性是需要重点考虑的。有个重要指标是CV值，CV值越小表明系统的稳定性越高，一般要求CV<5%。在软硬件系统确定、算法固定的情况下，增加的测量量使CV值降低。

2、准确聚焦

我们使用细胞计数仪，是要制备细胞悬浮液的。在这一过程中是不能完全去除死细胞或细胞碎片的。不能准确聚焦甚至不能精准识别黑白像素，进而导至不能精准识别什么是细胞，哪些是活细胞。具备自动聚焦的计数仪在这方面就完全不用担心，系统可以精准实现聚焦，有利于实现更精准的细胞识别。

3、易用性

操作简单、界面友好，是细胞计数仪需要考虑的重要因素。这个无需多说，用起来方不方便，自己感受最重要。

4、成本

成本需要有两方面的考虑：计数仪设备本身的成本以及细胞计数板与试剂的成本。

设备成本还是有考虑是否满足实验的需求，根据需求匹配适当的计数仪，而不是一味追求价格的低廉。抛开需求来谈成本是耍流氓！

有些细胞计数仪采用血球计数板或特殊材质的计数样本台，而不用一次性的耗材。这在耗材方面会有节约。血球计数板计数，即便用软硬件替代人，还不是那么精准。在不需要太高准确度的情况下，是可以考虑的。

特殊材质的样本台往往需要及时维护，防止损坏。一旦损坏，更换起来价格有可能要超过一次性计数板的费用。

明日下篇，猛博士会继续介绍计数仪软硬件及算法及其对细胞计数的影响。