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      甲状腺C细胞肿瘤是一种起源于甲状腺旁C细胞的神经内分泌肿瘤，占甲状腺癌的5%~10%。C细胞是一种分泌降钙素的细胞，降钙素是一种调节钙和磷代谢的激素。甲状腺C细胞肿瘤可以分为两种类型：甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma，MTC）和C细胞增生（C-cell hyperplasia，CCH）。MTC是一种恶性肿瘤，可以侵袭周围组织和淋巴结，也可以转移到远处器官。CCH是一种良性病变，表现为C细胞数量增多，但没有侵袭性。

    甲状腺髓样癌可以分为散发型和遗传型。散发型MTC占80%~85%，通常只累及甲状腺的一侧，不伴有其他内分泌异常。遗传型MTC占15%~20%，通常为双侧性或多灶性，与RET基因突变有关，可以与其他内分泌肿瘤并存，形成多发性内分泌肿瘤综合征（multiple endocrine neoplasia syndrome，MEN）。遗传型MTC又可以分为三种亚型：MEN2A、MEN2B和家族性MTC（FMTC）。

    甲状腺髓样癌的临床表现主要取决于肿瘤的大小、位置、侵袭程度和转移情况。早期MTC通常无症状，随着肿瘤的增大，可能出现颈部肿块、压迫感、咳嗽、声音嘶哑、吞咽困难等。部分患者可能出现与降钙素相关的腹泻、面部潮红等。MEN2A和MEN2B患者还可能有其他内分泌肿瘤的表现，如甲亢、高钙血症、嗜铬细胞瘤等。

    甲状腺髓样癌的诊断主要依靠血清降钙素水平、精细针吸切片（fine needle aspiration cytology，FNAC）和影像学检查。血清降钙素水平是MTC的最敏感和最特异的标志物，其水平与肿瘤负荷呈正相关。FNAC可以从颈部肿块中获取细胞样本，进行形态学和免疫组化检查，以确定C细胞的来源和恶性程度。影像学检查包括超声、CT、MRI等，可以评估肿瘤的大小、范围、淋巴结转移和远处转移。对于遗传型MTC患者，还需要进行RET基因突变的检测，以指导家族筛查和预防性手术。

    甲状腺髓样癌的治疗主要是手术切除肿瘤和淋巴结转移灶，术后根据降钙素水平判断是否需要进行放射性碘治疗或化疗。对于无法切除或复发的MTC患者，可以考虑使用靶向药物，如抑制RET和VEGFR的小分子抑制剂。

    甲状腺髓样癌的预后取决于多种因素，如肿瘤的分期、分子特征、手术效果等。一般来说，散发型MTC的预后较好，遗传型MTC的预后较差。根据美国甲状腺协会（ATA）的风险分层，MTC患者可以分为低风险、中等风险和高风险三类，其5年生存率分别为95%、75%和40%。

检测试剂：

血清降钙素水平检测：血清降钙素水平是MTC的最敏感和最特异的标志物，其水平与肿瘤负荷呈正相关。血清降钙素水平可以用于MTC的筛查、诊断、分期、预后评估和治疗监测。

RET基因突变检测：RET基因突变是遗传型MTC的主要致病因素，占MTC的15%~20%。RET基因突变可以导至多发性内分泌肿瘤综合征（MEN）2A、2B或家族性MTC（FMTC）。RET基因突变检测可以用于遗传型MTC的家族筛查和预防性手术指导。

    图源自NMPA官网

    CCDC6-RET是一种由CCDC6基因和RET基因融合而成的新基因，常见于非小细胞肺癌（NSCLC）中。CCDC6基因位于10号染色体短臂（10p13），编码一种具有螺旋线圈结构域的蛋白，参与细胞周期调控和DNA损伤应答。RET基因位于10号染色体长臂（10q11.21），编码一种受体酪氨酸激酶，参与神经发育和内分泌功能。CCDC6-RET融合基因通常由10号染色体内倒位导至，使得CCDC6基因的5'端与RET基因的3'端连接，形成一个包含RET激酶结构域的新蛋白。这种融合蛋白可以不依赖配体而自我激活，进而激活下游信号通路，如RAS-MAPK、PI3K-AKT等，促进细胞增殖、迁移和侵袭，导至肿瘤的发生和发展。

    RET基因是一种原癌基因，除了与CCDC6等多种基因发生融合外，还可以发生点突变或扩增等改变，引起其功能异常。RET基因的改变在不同类型的癌症中有不同的发生率和致病机制。例如，在甲状腺髓样癌（MTC）中，RET基因的点突变是主要的致病因素，占MTC的80%以上；而在甲状腺乳头状癌（PTC）中，RET基因的融合是主要的致病因素，占PTC的20%@~40%。在NSCLC中，RET基因的融合是一种罕见但重要的驱动事件，占NSCLC的1%2%，其中最常见的伴侣基因是KIF5B、CCDC6和NCOA4。

    目前已有针对RET基因异常的靶向药物开发和应用，如普拉替尼（pralsetinib）和塞尔帕替尼（selpercatinib），它们可以有效抑制RET激酶活性，阻断其下游信号通路，从而抑制肿瘤细胞的生长和转移。这些药物已经在多个国家和地区获得批准或加速审批，用于治疗携带RET基因异常的NSCLC或MTC患者。

FDA批准相关试剂：

图源自Thermo Fisher Scientific官网

    Thermo Fisher Scientific公司的 Oncomine Dx Target Test ，是一种基于NGS的多靶标检测试剂盒，可以同时检测23个肿瘤相关基因在NSCLC中的324个突变位点，包括RET基因在内。该试剂盒已经获得FDA批准和CE认证，可用于指导NSCLC患者接受靶向药物治疗。

    RET基因是一种原癌基因，可以发生融合、突变或扩增等改变，导至其功能异常，引发不同类型的癌症。其中，RET基因的点突变主要发生在甲状腺髓样癌（MTC）中，占MTC的80%以上，其中大部分为遗传型MTC，与多发性内分泌肿瘤综合征（MEN）2A、2B或家族性MTC（FMTC）相关。

    根据不同的突变位点和氨基酸变化，RET基因的点突变可以分为以下几类：

    位于外显子10的Cys634位点的突变，如C634R、C634W、C634Y等，是最常见的RET基因突变类型，占MTC的50%以上，与MEN2A相关。

    位于外显子11的Met918位点的突变，如M918T、M918V等，是第二常见的RET基因突变类型，占MTC的25%左右，与MEN2B相关。

    位于外显子13和14的其他位点的突变，如L790F、V804L、V804M等，是较少见的RET基因突变类型，占MTC的5%左右，与FMTC相关。

    位于外显子8和9的罕见位点的突变，如S891A、A883F等，是极少见的RET基因突变类型，占MTC的1%以下，与FMTC相关。

开发一款RET基因的点突变检测试剂盒，用于诊断和监测RET基因的点突变情况。可以用于以下目的：

对于有MTC家族史或临床表现的患者，可以进行RET基因的点突变检测，以确定是否携带致病性的RET基因突变，从而指导预防性甲状腺切除术或其他治疗方案。

    对于已确诊为MTC的患者，可以进行RET基因的点突变检测，以评估其预后风险和复发风险，以及是否适合接受针对RET基因异常的靶向药物治疗。

    对于有MTC家族史或临床表现的无症状家属，可以进行RET基因的点突变检测，以确定是否为潜在的MTC患者或携带者，从而进行早期筛查和干预。

    目前，有多种方法可以用于检测RET基因的点突变，如聚合酶链反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）、高分辨率熔解曲线分析（HRM）、Sanger测序、芯片杂交、荧光原位杂交（FISH）、液相芯片技术（LPA）、多重连接探针扩增（MLPA）、质谱法、下一代测序（NGS）等。

    不同方法的灵敏度、特异度、通量、成本和操作难度各有优劣，需要根据实验室条件和临床需求进行选择。一般来说，PCR、qPCR、HRM等方法适用于常见和已知的RET基因突变位点的快速筛查；Sanger测序、芯片杂交、FISH等方法适用于少量样本和未知位点的确证分析；LPA、MLPA等方法适用于大量样本和多个位点的批量检测；质谱法适用于高通量和高精度的定量分析；NGS等方法适用于全面和深入的多层次分析。较为简便快捷且普遍检验实验室都能做的当属qPCR法，qPCR是一种实时荧光定量PCR技术，可以利用荧光信号的变化实时监测PCR过程中每一次循环扩增后产物量的变化，并通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。qPCR的特异性和灵敏度依赖于引物和探针的设计，引物和探针必须与目标序列完全互补，且不与其他序列发生非特异性结合或引起二聚体形成。

    开发一款基于qPCR的单靶标检测试剂盒，可以检测RET基因的12个常见突变位点，包括M918T、C634R等，需要遵循以下步骤：

• 选择合适的荧光探针法，如TaqMan探针法或分子信标法。TaqMan探针法是一种利用Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针水解而释放荧光信号的方法，分子信标法是一种利用探针与目标序列杂交而改变荧光信号强度的方法。

• 设计特异性的引物和探针，覆盖RET基因的常见突变位点，如M918T、C634R等。引物和探针的设计需要考虑以下因素：长度、GC含量、Tm值、二聚体形成、自身结构、互补性、位置等。可以使用在线软件或数据库来辅助设计，如Primer3、Primer-BLAST、PrimerQuest等。

• 制备标准曲线，使用已知浓度和突变类型的RET基因模板，进行不同梯度的qPCR反应，得到不同浓度和突变类型下的Ct值，绘制Ct值与模板浓度或突变频率之间的关系曲线，用于后续的定量分析。

• 验证试剂盒的特异性、灵敏度、重复性和准确性，使用不同来源和类型的样本进行qPCR反应，比较试剂盒与其他方法（如Sanger测序或NGS）的结果是否一致，评估试剂盒的检测性能和可靠性。