最近涉及流式荧光的公司越发多了起来，相比于化学发光，它确实有自己独特的优势，其中最主要的特点就是可以实现1人份试剂的多项目联合检测。比如对于自身免疫的项目，化学发光一般都是单孔单检，流式荧光可以做到单孔多联检，也就是相同用量的血清，化学发光只检测了一个项目，流式荧光却检出了几个甚至几十个的项目。首先介绍一下最关键的磁珠。不同类型的磁珠混在一起，仪器是怎么区分开的呢？目前有以下几种类型：1.靠磁珠的大小加以区分。流式涉及两个概念，FSC（前向散射光）和SSC（侧向散射光）。从使用经验来看，颗粒越大的，FSC就越大；内部结构越复杂的，SSC就越大。怎么理解呢？比如对于FSC，磁珠的颗粒越大，磁珠间的间隙也就越大，光通过的几率也就越大，比如你用激光去照射一瓶面粉和一瓶大米，肯定大米的透光性会更好。对于SSC，我们可以想象一下，你用激光照射一堆透明的玻璃球，和照射一堆内部镶嵌了小星星的玻璃球，肯定后者的侧面散射光信号更强。那好了，流式仪器一般会用激光照射并收集FSC和SSC，做二维坐标图，根据图像来分别不同的磁珠。但是有一个问题，如果磁珠的制备工艺相似，那么它们的内部结构就类似，导至SSC都普遍接近，最终起到区分作用的只有FSC这个指标。但是我们希望不同项目的磁珠粒径尽量接近（4-6um），反应才比较均衡，所以仅仅靠FSC和SSC来区分的磁珠，可用性很小。2.掺入荧光素。有的公司只掺入了一种荧光素，比如苏州为度新开发的流式磁珠，首先靠FSC区分4um和5um的两个群体，然后每个群体又掺入了9个梯度的荧光素APC，最终做出了18重磁珠，这是一种开发思路；但是我们上面讲到了，磁珠的粒径最好是一致的，所以像是深圳唯公的磁珠，就掺入了两种荧光素，也就是磁珠的粒径都一样，靠的是两种荧光素的掺入比例来进行区分，这与luminex的开发思路是一致的，这样做出来的磁珠种类更多，也更利于免疫检测。对于自身免疫和过敏原这种抗体检测项目，一般都是采用的间接法。也就是磁珠标记抗原，检测抗体为PE（藻红蛋白）标记的抗人IgM或抗人IgG或抗人IgE等。也许有人会问，能不能采用捕获法呢？标记抗人Ig抗体，然后用不同的蛋白标记PE来进行检测？这样是不行的。虽然磁珠仍然可以分开，但是它们都可以抓住不同类型的Ig抗体，可以出现一阳全阳的局面，这显然是不可行的。对于双抗夹心的项目，同样是将标记抗体分别标记不同的磁珠，对于检测抗体，一般有两种操作：
二是将各个抗体分别标记Biotin，最终借助SA-PE进行最终的检测。一的难点是抗体与PE的标记，这对于很多公司都是一个技术壁垒，感觉操作容易产生很大的批间差；
二的特点是生物素标记比较简单，但是因为借助了SA-PE，所以反应步骤会增加，反应时间会延长，对于反应时间有要求的项目，则需要斟酌一下。不管是流式磁珠还是发光用的磁珠，目前大部分都还是羧基磁珠，所以在标记工艺方面来说几乎是一样的，只不过在数量方面会有较大差别。流式磁珠在使用的时候一般按照个数计量（如1×10^5个/mL），发光磁珠则一般按照重量单位mg/mL进行计量，所以发光的磁珠和抗体消耗是相对较大的。但是我们得相信，量的积累一定会保证质的提升，所以发光试剂在准确度方面一般是优于流式荧光的。并且由于流式磁珠是逐个地去测试荧光值，每个磁珠的荧光值难免存在差异，荧光结果的报告也会有不同的形式，可以用平均值，也可以采用中位数，但是这个数据也是会随着圈圈的大小和位置不断地变化。况且，由于微球反应完成后会出现聚集的情况，反应前和反应后的位置会发生位移，甚至有的出现明显地分散，导至距离太近的微球难以区分彼此，导至结果的误判。比如下图的例子，对于黄色标注的区域，我们很难界定微球的隶属关系，如果其中一个项目是阴性，一个项目是阳性，圈的位置稍有差池，两个项目的可能就都报成了阳性。
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